β14半乳糖基转移酶ⅰ在胚胎着床中的作用及与白血病抑制因子的相互调控生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。 与我_同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 堡主茎 -签-7-日期：丝年』月堕日 学位论文版权使用授权书本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、使 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、使 用学位论文的规定，同意大连医科大学保留并向国家有关部门或机构 送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阗。本人授权 大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库 进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论 文。 论文作者签名：j薹塑2 指导教师签名： 丝 签字囡期： 7塑艮年土月丛日 13 13 1，4．半乳糖基转移酶I在胚胎着床中的作用 及与白血病抑制因子的相互调控 硕士研究生： 侯 琼 指导教师： 孔英 副教授 指导教师： 张嘉宁 教授 专业名称： 生物化学与分子生物学 摘 要 目的：白血病抑制因子(LIF)因其能诱导小鼠M1型白血病细胞分 化为巨噬细胞和抑制白血病细胞增殖而得名，是一类具有广泛生物学功 能的分泌型糖蛋白，是介导胚泡着床最主要的细胞因子。LIF在胚胎的 生长、发育及分化中起重要作用。许多研究表明：含LIF的条件培养液 可促进胚胎发育、加速孵化、提高其存活率、以及促进滋养层细胞增殖 和内细胞团的生长、加速胚胎脱透明带。已知LIF对着床网络中的多种 因子(如基质金属蛋白酶MMPs、表皮生长因子EGF等)均有调节作用， 但其对参与精卵识别的细胞黏附分子13 1，4。GaIT I是否参与胚胎着床 及其在着床中的作用尚不清楚。 B l，4．半乳糖基转移酶I(13 l，4．galactosyltransferase!。13 1， 4．GaIT I)是目前人们研究最广泛的糖基转移酶之一，它是B l，4．半乳 糖基转移酶家族中最早被发现的，也是研究最深入的一个成员．。B l， 4．GaIT I以长型和短型的形式分布在高尔基体和细胞膜两种不i司的亚细 胞结构上，行使不同的功能。高尔基体上的13 l，4．GaIT I功能是将半乳 糖基从UDP．半乳糖基转移到N．糖链的末端N．乙酰氨基葡萄糖上形成13 l，4．糖苷键：细胞膜上的B l，4．GaIT I作为细胞黏附分子参．彳了一系 列生理过程，例如细胞的黏附、铺展、精卵识别、神经轴突的延伸、间 充质细胞、肿瘤细胞的迁移以及晚期桑椹胚的致密化。而胚胎昔床与肿 瘤细胞的转移、浸润有很多相似之处。本文利用人子宫内膜上皮细胞 (RL95．2，模拟着床前子宫内膜)和人胚胎细胞(JAR、模拟着床前胚胎) 组成的体外着床模型，采用RNAi干涉(或过表达)、RT．PCR、细胞免疫 化学染色及Dot．blot等方法研究LIF与13 l，4．GaIT I之间的相互调控及 其对胚胎着床的影响。 方法：人子宫内膜上皮细胞(RL95．2)经含LIF或LIFAb培养基培 养，或经B 养，或经B 1，4．GaIT I基因干扰(或过表达)载体转染后，应用细胞免 疫化学染色、RT-PCR和Dot．blot方法，分析LIF对13 l，4．GaIT l表达 的影响，或调控§l，4．GaIT l基因表达盾对LIF表达豹影响，并通过体 外着床模型分别观察LIF及B 1，4．GaIT I对胚胎着床的作用。 结果：(1)与正常培养组相比，在经LIF培养24h后，RL95-2细胞 的Gal§1．4GIcNAc合成量增翔；参j，4．GaiT I的基蠢表达水平增高； B 1，4。GaIT I酶蛋囱水平提高。同时，胚胎的黏附率(83．5％)也明显 高于正常培养组(70％)。而经LIFAb处理24h后，Gal B 1．4GlcNAc的 合成量下降；多j，霉．GalT歹基因的表达水平降低；§l，4．GaIT l酶蛋 自的合成水平减少。同时，胚胎的黏附率(35％)也明显低于正常培养 组(70％)。(P0．05) (2)在芦?，4，GalT 1基因表达载体转入厝60h，RL95．2细胞蠹有明显 的绿色荧光蛋自表达，说弱载体转染效果良好。与正常培养组和空载体 转染组比较，基因干扰组Gal B 1．4GIcNAc的合成明显下降；过表达组则 明显增简。同时观察∥J『，4．GalT，基因过表达组，其五伊基因和蛋白的 表达增离，胚胎静