天净沙系列细胞核蛋白提取试剂盒（溶胀法）-天恩泽.PDFVIP

天 CAT#:90613-50 净 低温运输和保存 沙 系 列 细胞核蛋白提取试剂盒 （溶胀法） Nuclear Protein Preparation Kit 使用手册V1.0 北京天恩泽基因科技有限公司 北京市海淀区上地信息路26 号北京市留学人员海淀创业园中关村创业大厦506 网址： ；电话：400-6765278 ；电邮：order@ 产品及特点 DNA 只存在于细胞核内，因此参与转录调节和DNA 复制的蛋白质主要存在于 细胞核中，要研究蛋白质与 DNA 的相互作用，首先需要制备能够与DNA 作用的 天然细胞核蛋白质。目前、细胞核蛋白质制备方法一般都比较繁琐，一次处理大量 样品时尤其不便，为此本公司基于溶胀法原理开发了本产品，用于从哺乳动物组织 和培养细胞核蛋白的温和微量提取，它具有下列特点： 1. 提取制备过程简便，只需要一小时。 2. 实验重复性好，尤其适合同时处理多个样品。 3. 可用于培养的动物细胞，也可以用于新鲜组织细胞。 4. 提取步骤温和，制备的核蛋白能保持天然活性，可以直接用于转录因子活性分 析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、DNA 足迹图实验和甲基化干扰实验酶活性测定等研究。 5. 1×10E6 个细胞中可以得到50-70 ug 的核蛋白质。 6. 只适用于哺乳动物组织和培养细胞，不适用于植物和真菌等生物。 规格及成分 成 份 编 号 小扁盒包装 动物细胞溶胀液 9 1203 50 mL 动物细胞核溶胀液 90613b 10 mL 使用手册 90613sc 1 份 运输及保存 低温运输和保存，有效期一年。 自备试剂 PMSF、DTT、PBS、胰酶溶液等 使用方法 实验前准备：取适当量 （根据样品数量确定）的动物细胞溶胀液和动物细胞核溶胀 液到新的塑料瓶中，置于冰上预冷，并在使用前数分钟内同时向动物细胞溶胀 液和动物细胞核溶胀液中加入自备的PMSF 和DTT，使PMSF 的最终浓度为 0.2 mM ，DTT 的最终浓度为1 mM。实验中所用试剂均需先预冷。 一、提取培养细胞和悬浮细胞细胞核： 1. 培养细胞：将覆盖率为55-65%的培养细胞用自备的胰酶溶液按标准的胰酶法 处理，然后刮到 1.5 mL 塑料离心管中，4℃ 600g 离心3 分钟，小心弃上清。 细胞数量最好在5×10E5-7 个。细胞沉淀体积约0.1mL。 2. 悬浮细胞：直接将5×10E5-7 个悬浮细胞转移到 1.5 mL 塑料离心管中，4℃ 600g 离心3 分钟，小心弃上清。细胞沉淀体积约0. 1mL。 3. 用 1mL 自备的预冷的PBS 缓冲液重悬细胞沉淀，然后 4℃ 600g 离心3 分 钟，小心弃上清。注意：必须尽快用PBS 缓冲液洗涤细胞沉淀，否则沉淀细 胞产生的CO2 将使局部pH 减低产生毒性。 4. 在细胞沉淀中加入 1mL 预加了P