高效液相色谱在制药行业中的应用培训课件.ppt

高压输液泵的选择 平流（单泵） 高压梯度 使用多台色谱泵，在泵后混合 配置灵活、简单，脱气简单 低压梯度 用单泵产生梯度，泵前混合 对脱气要求高 检测器的选择 a、紫外可见光检测器 应用最广泛的检测器，是在UV及VIS区有吸收物质检测的首选检测器。 b、示差折光检测器 一种通用型的检测器，灵敏度偏低，对温度稳定性要求过高，不 能用于梯度洗脱。通常用来分析糖类及高聚物（GPC） c、荧光检测器 灵敏度极高，常用来进行痕量检测。 d、二极管阵列检测器（DAD） 可用于全波长的检测，可以测量峰纯度，可在线得到色谱图和光谱图。 e、蒸发光散射检测器 一种通用型检测器，它可以检测挥发性低于流动相的任何样品。ELSD可以用于测量无生色团物质的检测，如碳水化合物、类脂物、聚合物、不进行衍生化的脂肪酸及氨基酸、表面活性剂及结构不明又无标准的物质的检测。 根据分离模式划分的色谱柱类型 色谱柱的选择 常用色谱柱类型 1.ODS（C18）—应用范围最广的填料，大部分小分子有机化合物都可进行分析 2.C8、C4—保留要比C18弱，适合用于大分子的多肽和蛋白类的分离纯化 3.氨基柱—正反双模式，主要用于小分子糖类化合物 4.苯基柱—通常用于分离含苯环的化合物 5.氰基柱—正反双模式，和ODS基不同的色谱间作用力，因而氰基柱拥有独特的选择性 6.正向硅胶 7.环糊精—根据物质光学性质的不同进行手性分离 进样系统的选择 六通进样阀 六通阀的构造 a. Load状态 b. Inject状态 自动进样器 为保证重现性以及峰形等，很多情况下需要使用柱温箱来控制柱温。 选配：恒温装置 引言： HPLC的特点 HPLC在制药行业中的应用 药物色谱分析方法的开发 药物色谱纯化方法的建立和优化：从分析到工业制备 目 录 内容提要 药物色谱纯化方法的建立和优化：从分析到工业制备 理论的放大 设备的放大 分析型色谱：线性色谱 指组分在固定性和流动相中的平衡浓度呈正比例关系，即吸附（分配）等温线为一条直线。 用于分离和鉴别样品中的组分，为此希望能在尽可能小的进样量下，提供尽可能高的组分分辨率。 制备色谱：非线性色谱 在制备色谱中，进样量一般都比较大，例如在克量级范围，这时样品在流动相和固定相中的比例不再是正比例的关系，相对应的吸附（分配）等温线将发生弯曲。 用于分离、富集或纯化混合物中的某一或某些组分，为此需要一定的处理量，一般进样量比分析型色谱大得多。能有适当的分离度，并要考虑层析分离过程的规模、速率和分离成本。 理论的放大：非线性色谱 线性色谱 分析 制备 非线性色谱 理论的放大：非线性色谱 制 备 色 谱 峰 型 理论的放大：非线性色谱 色谱峰型不再对称 色谱峰的保留时间随着进样浓度而变化 色谱峰高度（峰面积）与 进样浓度不成正比 非 线 性 色 谱 的 特 点 理论的放大：非线性色谱 浓度超载进样 体积超载进样 PK Langmuir型容量因子降低，峰形从高斯曲线变为三角形 提高样品的浓度，保持进样体积不变；取决于组分在流动相中的溶解度 峰高不变，峰变宽并呈矩形 取决于进样体积，生产效率决定于制备柱直径，需要小颗粒填料 理论的放大：过载进样 理论的放大：过载进样 理论的放大：过载进样 应尽可能选用流动相来溶解样品，但应注意样品在流动相中应有良好的溶解度。同时，若样品体积太大，分辨能力就会下降；若样品过浓，则可能在柱的顶部形成沉淀。 尽管如此，为每次可分离得到更多的样品，还是应在小体积的流动相中溶解较多的样品。 可将样品溶于不同于流动相的溶剂，但用此法时需很谨慎。 设备的放大：分析设备与制备设备 分析 制备 应用范围 定性、定量 检测样品的组成 定性分析：检测的灵敏度 定量分析：分离度、再现性 从混合物中提取、分离、纯化样品 样品中特定成分的高纯度获取，大量、廉价的制备 填料粒径 ≤5um ≥10um 流速 0.001-9.999ml/min 100~80000ml/min 进样量 0.01-2mg 1-500000mg 管路 1/16” 1/8”~1/4 进样方式 进样阀 进样阀或进样泵 流动相 不回收 回收 分离方式 线性 非线性 设备的放大：分析设备与制备设备 设备的放大：分析设备与制备设备 更大的容器：储罐 流量更大的输液泵 ≥50ml 定量管≥1ml 进样泵≥50ml ≥10mm法兰柱 DAC 大体积流通池 接溶剂回收系统 制备系统 分析 制备 放 大 优化分析方法的选择性 在分析柱上进行 超量载样 放大到制备柱 设备的放大：过程 高效液相色谱在制药行业 中的应用 应用技术发展部 2011年 北京创新通恒科技有限公司是一家面向全球的专