典型区域抗生素抗性基因的存在形态及环境行为环境科学专业论文.docxVIP

文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取 文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取 得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包含任 何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所涉及的 研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本学位论文 原创性声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者签名： 遏凌 2010年05月30日 非公开学位论文标注说明 根据南开大学有关规定，非公开学位论文须经指导教师同意、作者本人申请 和相关部门批准方能标注。未经批准的均为公开学位论文，公开学位论文本说明 为空白。 论文题目 申请密级 口限制(≤2年) 口秘密(≤10年) 口机密(≤20年) 保密期限 20 年 月 日至20 年 月 日 审批表编号 批准日期 20 年 月 日 限制★2年(最长2年，可少于2年) 秘密★10年(最长5年，可少于5年) 机密★20年(最长10年，可少于10年) 摘要摘要 摘要 摘要 鉴于海河水系在环渤海经济快速发展区的重要地位及前期研究发现海河存 在相当的抗生素污染。本研究采集天津段代表性采样点的底泥及水体样本，检 测抗生素抗性基因的存在形态，同时研究DNA分子在泥／水界面上的吸附解吸行 为，，主要发现： 1．提出直接提取海河区域大沽桥、洪泥河、新开河、马厂减河与海河入海 口底泥与水体不同形态DNA(胞内、胞外、染色体和质粒DNA)的有效方法。利 用聚合酶链式反应(PCR)扩增验证提取方法的可靠性，同时检测海河典型区域样 品中主要抗生素抗性基因的存在形态。 结果证明，不同形态DNA的提取方法可以在抗生素抗性基因PCR扩增反 应及后继的分子研究中使用。所有样品中，提取的胞外DNA浓度高于胞内DNA 浓度，染色体DNA高于质粒DNA浓度。抗生素抗性基因的PCR结果表明，胞 外DNA的抗性基因检出率与胞内DNA的相同(50％)，皆高于染色体DNA(25％) 与质粒DNA(10％)的抗性基因检出率。在检测的抗性基因中，sull最为普遍， 检出率达到100％，随后是sul2(75％)、tetW(70％)、tetT(65％)。位于染色体DNA 上的抗性基因多于在质粒DNA上的。未检测到在海河样品中质粒DNA上的 sul2。考虑到抗生素抗性基因的移动性及转移性，亟需对抗生素的使用加以管理。 2．以大沽桥底泥、马厂减河底泥及外滩底泥、实验室培养的大肠杆菌(EcotO 及底泥菌体复合体系作为实验材料，研究DNA吸附解吸行为及腐殖酸(numic acid)与磺胺甲恶唑(Sulfamethoxaz01)对DNA吸附解吸行为的影响。 DNA在底泥的吸附等温线符合L．型曲线，菌体与底泥复合体系符合Ⅲ类吸 附曲线。底泥对小片段DNA的吸附量高于对大片段DNA的吸附量。菌体的DNA 吸附量高于底泥与菌体复合体系。混合体系的DNA吸附量高于单独两者吸附量 的一半之和。 腐殖酸与磺胺甲恶唑促进DNA吸附，腐殖酸对DNA促进作用大于磺胺甲 恶唑。腐殖酸及磺胺甲恶唑的等温影响吸附曲线为L．型曲线。两者对大片段DNA 吸附增长量小于小片段DNA，对底泥DNA的吸附促进作用大于对菌体及复合 体系。 Langmuir方程与Freundlich方程都可以很好的描述DNA吸附行为，相对 T 实验结果表明，模拟自然状态下的底泥DNA解吸率最小，吸附的DNA最 实验结果表明，模拟自然状态下的底泥DNA解吸率最小，吸附的DNA最 稳定。大片段DNA的解吸率小于小片段DNA，复合体的DNA解吸率大于单独 底泥与菌体解吸率一半之和。添加的腐殖酸对DNA解吸率的影响趋势与自然状 态下DNA解吸相似。腐殖酸对小片段DNA的解吸影响不大，对大片段DNA 菌体的解吸产生抑制作用、复合体系产生促进作用。磺胺甲恶唑对DNA的解吸 呈抑制作用(除大沽复合体系的小片段DNA解吸)。 关键词：提取方法抗性基因吸附解吸腐殖酸磺胺甲恶唑 II ABSTRACTConsidering ABSTRACT Considering the significant position of Haihe River in economic development of Bohai Rim Region and preliminary research on antibiotics which found there were considerable antibiotics in Haihe River．In this research we sampled the sediments and water of main regions of Haihe River t