肝细胞生长因子受体表达对胃癌肝转移的影响外科学肝胆外科专业论文.docxVIP

肝细胞生长因子受体表达对胃癌肝转移的影晌捅 肝细胞生长因子受体表达对胃癌肝转移的影晌 捅 矍 { ， 』胃癌是消化道常见恶性肿瘤，病死率高。肝转移是晚期胃煽忠者死L 的融要原因，目前对其发生机理知之尚少。以往研究表l必：肿瘤细胞具 有异质性，肿瘤转移具有器官特异性。这种转移的器官特异性卜要与靶器 官的血管内皮细胞特异性表型的表达、内皮细胞下基底膜成分特异性基底 膜蛋白的表达以及靶器官微环境中刺激移动和增殖的生长冈予的存在等儿 方面有关。近年来体内实验观察到：已经成功到达靶器官内的fll|l瘤细胞中 绝大多数处于休眠状态，仪有少数可形成微转移灶(miCrolnetastasis)， 而其中又仪有极少数发展成转移灶(marcometastasis)。这表明转移靶器官 微环境与肿瘤细胞的相互l乍用是影响转移灶7髟成的最终环节，上L同器官 特异性转移的其他环节相比，其更具治疗靶向性。 肝细胞生长因子(HGF)是问质来源的肝脏微环境中重要的，L长因子， 具有多种功能。呈高浓度分布。肿瘤细胞到达肝脏后，存在利川其本身表 达的肝细胞生长因子受体(c—Met)来增加其肝转移能力的可能，剥结肠癌和 黑色素瘤肝转移的研究都支持这种观点。在胃癌q]／存在肝细胞_：长因子受 体表达，但尚未见其对胃癌肝转移影响的研究。r 探讨胃癌肝转移机理不能仪单纯依赖临床标本，应用肝转移细胞株或 细胞亚系建立肝转移模型是胃癌肝转移研究的必要手段。但目前围内尚未 见胃癌肝转移细胞亚系或细胞株的建立。为更能体现胃癌肝转移的全过程， 本实验利用裸鼠首次采用皮下瘤胃原位移植的方法及结合J’I：转移灶原代培 养的方法，重复操作2轮，筛选到胃癌肝转移细胞亚系SGC一7901L2(简 称L2亚系)，为进一步研究胃癌肝转移提供了基础。丛因治疗址肿瘤治疗 领域的研究热点，核酶可因切割特定靶mRNA而下调目的蛋白，从而在肿 瘤基因治疗中受到关注。以往研究表明：转染c．met核酶揍Ⅲ可以下调 c．Met表达，故c—met核酶基因转染的方法适于c—Met表达相关的研究。 V ／l本实验针对胃癌标本、胃癌肝转移标本、胃癌细胞培养及目癌肝转移 ／ l本实验针对胃癌标本、胃癌肝转移标本、胃癌细胞培养及目癌肝转移 动物模型， 采用免疫组化、原位杂交、蛋白E¨记和基因转染等方法，就 c．Met表达对胃癌肝转移的影响进行了研究。旨在从肿瘤细胞适应转移靶 器官局部环境角度、在生长因子及其受体这一层次。深入理解剧癌肝转移 机理，以期为胃癌肝转移防治策略提供理论依据。在上述研究cI_J主要获 得以下结果： 1．采用免疫组化方法对晚期胃癌标本c．Met表达进行检测，发现：肝 转移组c—Met阳性率为75％(15／20)，无肝转移组c．Met阳性率为36．7％ (11／30)，两组问具有统计学差异(p0．05)；在11例肝转移灶中c．Met 阳性率为81．8％(9／11)。说明胃癌组织中c。Met表达与胃癌肝转移能力相 关。 2．通过2轮筛选，成功获得了L2胃癌肝转移细胞亚系，比较SGC．7901 (母系)与L2丑E系的生长特性发现：两者细胞增殖指数无明显区刖：体外培 养生长能力相似：接种至裸鼠皮下，L2亚系的生长速度随肿瘤增大而渐高 于母系：将母系和L2亚系细胞注入裸鼠脾脏，5周后肝转移发生率分别为 28．6％(2／7)和90％(9／10)，具有统计学差异(p0．05)。i；8ⅢJ L2亚系肝 转移能力明显提高。 3．对母系及L2亚系相关分子表达检测显示：母系及亚系·{，CEA和 bFGFR均无表达而TGFB R．和IiGF虽均为阳性表达，但不具明显差异：AFP 在母系中为可疑阳性，在亚系中为不均一弱阳性表达：而c．Met在母系中 为弱阳性表达，在L2亚系中其表达明显增强。Western blot和原位杂交结 果也分别显示L2亚系中c．Met和c．met mRNA表达升高。这表明在 SGC一7901和L2亚系中存在HGF-c．Met自分泌环路；说明细n世亚系筛选 过程使亚系细胞c-Met表达得到一定程度增强，c—Met表达增强可能参与 了胃癌肝转移中较为重要的过程。 4．应用含有c-met核酶(Ribozyme)的真核表达载体pZeoUIEcoSDe 转染L2亚系细胞，经Zeocin筛选出转染子L2RZ，该细胞中c-111et mRNA 表达减少，c·Met表达下降，说明c．met核酶基因转染可以明显卜-调c。Met Vl 表达；将L2RZ缨魁注入裸鼠辫皴，5周时册转移发生率为30％(：{／10)。州 表达；将L2RZ缨魁注入裸鼠辫皴，5周时册转移发生率为30％(：{／10)。州 L2缨跑塌比，骚转移发，蔓率甥曼降低{p(o。05)，轰蜴c—Met表达量影蚋了 霹癌脬转移形成。 5．在SGC．7901、L2