二化螟触角感受器类型及其gobp2基因保守区的克隆与序列分析农业昆虫与害虫防治学专业论文.docxVIP

摘要以往研究表明，昆虫触角气味结合蛋白在昆虫感知外界信息物质中起作用； 摘要 以往研究表明，昆虫触角气味结合蛋白在昆虫感知外界信息物质中起作用； 并且明确这种蛋白广泛地分布在触角感受器中。为了对二化螟触角气味结合蛋白 进行电生理及行为学方面的研究，我们有必要首先清楚认识二化螟触角感受器以 及得到足够的气味结合蛋白。本文就此展开了研究，对二化螟触角感受器做了深 入观察，同时通过分子生物学手段克隆了GOBP2基因。迄今为止(以 GenBank／EMBL中登记为准)，本文是国内外首次开展的鳞翅目螟蛾科昆虫触角 气味结合蛋白的分子生物学研究。具体结果包括以下两个部分： 1．运用光学显微镜和扫描电子显微镜对二化螟蛾Chilo suppressal括fWalker)触角 感受器的外部形态、分布及其相关数量作了观察和统计。由于鞭节要比雌虫的略 长，因此雄虫触角要长一些，但是二者的鞭节数目大致相同。雌雄触角均具有6 种类型的感受器：毛形感器(sensilla trichodea)、刺形感器(sensilla chaetica)、 腔锥形感器(senailla eoeloconica)、栓锥形感器(sensilla styloconica)、锥形感 器(sensilla basiconica)和鳞形感器(sensilla squamiformia)。除了锥形和鳞形 感器外，其余四种感受器都存在两种亚型。毛形感器在触角分布上存在性二型现 象：分布在雄虫触角上的毛形感器绝太多数是长毛形感器(Lst)．短毛形感器 (Sst)分布数量很少；而在雌虫触角上则主要分布着短毛形感器(Sst)：同时， 研究发现毛形感器在数量分布上也存在性二态现象：雄虫触角具有的数量显著多 于雌虫的数量。同时，本文对这些触角感器的生理功能也进行了一定地分析和讨 论。 2．比较已报道11种昆虫的GOBP2基因保守序列，设计了一对简并引物j 运用PCR技术，以二化螟∞ff0 suppressalis(Walker)触角cDNA为模板进行扩增， 获得了一条450bp左右的特异性条带。将以上片段克隆到T-easy载体上，获得重 组子pGEM．C．GOBP2。序列测定和结构分析结果表明，二化螟GOBP2保守区 编码序列全长416bp，编码138个氨基酸残基。另外，序列中有6个保守的半胱 氨酸位点，具有气味结合蛋白的典型特征。同时以基因组DNA为模板进行PCR 扩增，得到了一条1．8kb左右的特异性条带，同样克隆到T-easy载体上得到 扩增，得到了一条1．8kb左右的特异性条带，同样克隆到T-easy载体上得到 pGEM—G-GOBP2重组子，进行测序。结果表明，该序列长1882bp，含有长度分 别为219bp和1247bp的两个具有典型GT-AG结构的内含子。对触角cDNA为 模板进行扩增的产物进行凝胶电泳检测，可初步看出，GOBP2基因在二化螟触 角中特异性表达，但在成虫的除去触角的其它组织中不表达，这有待Northem blot 进行验证。 关键词：鳞翅日，螟蛾科，二化螟，触角，触角感受器，普通气味结合蛋白2 基因克隆，序列分析 Il 月|J 月|J 吾 二化螟ChilD suppressalis(Walker)属鳞翅目Lepidoptera，螟蛾科Pyralidae， 俗称钻心虫、蛀秆虫(Stem borer)等，以幼虫蛀稻茎为害，在分蘖期蛀茎造成枯心 (Dead heart)和无效分蘖(invalid tiller)，抽穗期造成白穗(White head)，成熟期 造成虫伤株，使水稻减产。据程家安、祝增荣等(1998)论述，在我国，由于近几 年来单双季稻混栽、机械收割高位留桩及多数品种均不抗螟虫等原因，螟虫的危 害程度和为害面积逐年上升，严重时可造成90％的损失，而且随着农业生产结构 的调整，这一趋势还将一直持续。 当前，化学防治是降低螟虫种群数量的最为普遍的手段，但已产生了一系列 的问题，如环境问题、安全问题、生产成本问题等。如长期使用杀虫双的地区， 防治二化螟的效果已大大的降低，且在广大稻桑重叠地区对桑蚕极不安全；三唑 磷的效果一般，还杀伤捕食性天敌、刺激褐飞虱、白背飞虱、灰飞虱繁殖力，引 起中后期种群再增猖獗(ChengZhu，1994；程家安等，1995)；微生物农药苏云 金杆菌廓对环境安全，目前已有不少转历水稻的成功报道(IRRI．1997)，但由于 存在作用缓慢、知识产权、生态风险、目标害虫很可能很快产生抗性、以及对人 体健康等等不确定的因素，大面积推广的前景尚未明确。因此，必须发展新的防 治方法。 研究表明，昆虫能够感受空气中的挥发性化合物，并将此作为交配、觅食和 寻找生殖场所的信息。利用这一特性来监测和诱杀害虫是一个有效的预测和防治 途径。这种方法与其它