人睾丸特异表达基因vcy编码蛋白质功能的初步研究精子发生相关基因数据库的构建生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

中国协和医科大学毕业论文 中国协和医科大学毕业论文 中文摘要 中文摘要 人Y染色体上的基因具有男性特异的重要生物学功能，与男性性征 有着直接的关系。( 精子是男性特有的生殖细胞，其发生是一个高度有序 的细胞分化过程，也是诸多相关基因按照严格的时空顺序转录、表达和 相互作用的结果。精子相关蛋白的功能研究对于揭示精子发生及受精过 程的分子机制有着重要的意义，既有助于阐明精子发生的机理，又为探 索不育机理和寻找免疫避孕的新途径奠定理论基础，’ VCY(Variable Charge Y)是定位于Y染色体上的睾丸特异基因。f 121 基因全长552bp，含有一个375bp的开放阅读框，编码一个125个氨基酸 的蛋白质(pI 9．4)，预测分子量为12．9KD。VCY编码蛋白富含Ser、Arg、 和Pro，并含有一个可能的核导向序列131(Bipartite nuclear targeting sequence)，初步推测其为DNA或RNA结合蛋白。厂4 为研究VCY的功能，我们设计了相应的引物并PCR扩增人睾丸RT 产物获得其cDNA全长。构建了原核表达重组质粒，在大肠杆菌中大量 表达后，通过SDS．PAGE切胶回收获得了高纯度的表达产物，进而免疫 家兔获得相应的抗体。我们用Western blot检测了抗体的特异性，并在人 睾丸免疫组织化学实验中对VCY编码蛋白表达进行了定位观察，发现它 表达于精原细胞和精母细胞中，并且在细胞核部位相对集中。我们还将 VCY基因cDNA全编码区克隆到pDsRedl．N1载体中，荧光蛋白显示VCY 基因在COS7细胞的细胞核中表达。f因此，初步推测VCY蛋白可能是一 种参与细胞有丝分裂或减数分裂过程的调节因子。 目前，生物信息学的研究、开发和应用已经成为当今生命科学与信 息科学的前沿和热点。随着本组精子相关基因研究工作的深入进行，数 据搜集及整理更加显得势在必行。生物信息学的方法无疑给这一研究提 供了最好的平台。『-’ 本文重点叙述了如何利用生物信息学方法收集并整理精子发生相关 基因数据，建立一套完整的数据信息管理与发布系统。 《基于目前流行的Pc机及网络设置，我们采用MicrosoftAccess作为 数据库管理系统(DBMS)，以Windows2000 Server作为服务器系统，建 !国垃塑匡型盔堂望些堡塞 !国垃塑匡型盔堂望些堡塞 ±塞塑墨 立了Gene On Line工作站。数据库的主要数据来源于美国NCBI的 GENBANK以及PUBMED、EMBL的Swiss．prot。我们本着与国际接轨 的原则，选用了ASP作为编写环境，采用Web方式作为输出方式，利用 VBscript及Javascript语言相结合完成动态信息发布系统。厂丫 为了满足不断更新的数据，我们建立了新基因提交、基因新资料更 新页面，使用者通过其可直接提交数据，系统自动审核后会将输入的数 据按照固定格式存储于数据库中，这避免了管理人员烦琐的数据库系统 操作，利于数据库的维护。(本系统采用会员制，每个使用者只需通过简 单的注册即可使用，便于管理者与各用户间的联系及合作，在最大限度 上达到了方便与安全的统一。 目前，本数据库及查询系统已在中国医学科学院基础医学研究所局 域网上得到了成功的运行。为了将来在Intemet上“安家落户”，我们以动态信息发布系统为核心，构建了—Gene O—n Line N弹iNNg眵o) r 关键词：精子发生?VCK√原核表达：westem blot、免疫组织化∥ 生物信息学Y ASP、数据库∑7数据搜索 生里进塑匡型盔堂望些堡塞 生里进塑匡型盔堂望些堡塞 一————————!望!ii里 ABSTRACT The genes on Y chromosome have many important functions to male． Spermatogenesis is a complex course during which many genes are transcripted and translated un