太平洋牡蛎防御素在毕赤酵母中的重组表达及其抑菌活性.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 崔旭 等/太平洋牡蛎防御素在毕赤酵母中的重组表达及其抑菌活性 91 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn Jan. 25, 2019, 35(1): 91−101 DOI: 10.13345/j.cjb.180119 ©2019 Chin J Biotech, All rights reserved ·海洋生物技术· 崔旭，陶妍，王强厚，张亚莉，颜倩倩 上海海洋大学 食品学院 上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心，上海 201306 崔旭, 陶妍, 王强厚, 等. 太平洋牡蛎防御素在毕赤酵母中的重组表达及其抑菌活性. 生物工程学报, 2019, 35(1): 91–101. Cui X, Tao Y, Wang QH, et al. Recombinant expression of Crassostrea gigas defensin in Pichia pastoris and its antibacterial activity. Chin J Biotech, 2019, 35(1): 91–101. 摘 要: 防御素是一类富含精氨酸和半胱氨酸的内源性阳离子抗菌肽，是软体动物抵御各种病原微生物侵染的重 要免疫因子。太平洋牡蛎防御素 ( Crassostrea gigas defensin ，CgD) 近羧基端的43 个氨基酸残基构成了其成熟肽 区域，决定了CgD 的生物学活性。首先通过逆转录PCR 和设计特异性引物从太平洋牡蛎外套膜中分离并扩增到 3ʹ端添加和不添加 6×His 标签的两种目的基因 CgDH+ – 和 CgDH ；与 pPICZαA 连接后构建的重组表达载体 + – (pPICZαA- CgDH 和pPICZαA- CgDH ) 电转至毕赤酵母Pichia pastoris X-33 中，使用1.0%甲醇诱导表达目的蛋白 + – CgDH 和CgDH ，最适培养条件为29 ℃、250 r/min 、72 h；通过固化金属离子亲和层析 (IMAC) 获得分子量为 5.78 kDa 的纯化的重组蛋白CgDH+ ，根据其蛋白质浓度推算表达量为2.32 mg/L 。经MALDI-TOF-TOF 质谱分析 + – 证明纯化产物即为预期的目的蛋白。抑菌试验结果显示分别含重组蛋白 CgDH 和重组蛋白 CgDH 的培养液上清 对金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus 和铜绿假单孢菌Pseudomonas aeruginosa 都具有抑菌活性，表明重组蛋 白中6×His 标签的存在与否并不影响其生物学活性。 : 太平洋牡蛎，防御素，毕赤酵母，重组表达，抑菌活性 Recombinant expression of Crassostrea gigas defensin in Pichia pastoris and its antibacterial activity Xu Cui, Yan Tao, Qianghou Wang, Yali Zhang, and Qianqian Yan Shanghai Engineering Research Center of Aquatic-Product Processing Preservation, College of Food S