cocktail探针药物法评价丹参酮iia对大鼠肝微粒体细胞色素p450不同亚型体外代谢活性的影响药学药理学专业论文.docxVIP

天津医科大学硕士学位论文中文摘要 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的： 建立评价大鼠肝微粒体药物代谢酶细胞色素P450(Cytochrome P450， CYP450)不同亚型CYPlA2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4 活性的“Cocktml”探针药物溶液的高效液相色谱检测方法；优化肝微粒体孵育条 件，建立肝微粒体体外孵育体系，研究丹参酮IIA对大鼠肝微粒体该6种主要 CYP450亚型体外代谢活性的影响，为临床合理用药提供参考。 方法： 选择CYPlA2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4的特 异性代谢底物咖啡因、美托洛尔、奥美拉唑、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗和咪达唑 仑制备成“Cocktail”探针溶液，建立同时测定该6种探针药物在肝微粒体中的高 效液相色谱检测方法。通过优化微粒体蛋白浓度和孵育时间，建立肝微粒体体 外孵育体系。研究丹参酮IIA对大鼠肝微粒体内6种主要CYP亚型活性的影响。 实验分三组进行：丹参酮IIA组、空白对照组和无活性组(不加大鼠肝微粒体组)， 每组实验平行三个样本。应用高效液相色谱．紫外检澳JJ(HPLC．uv)法检测大鼠肝 微粒体中丹参酮IIA对探针底物代谢剩余量的影响，得到酶活性百分数，以丹参 酮IIA浓度的对数为横坐标，以酶活性百分数为纵坐标，使用GraphPad Prism 5．0 软件按照非线性回归，作图并计算IC50值。评价丹参酮IIA在大鼠肝微粒体孵育 体系中对CYPlA2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4体外 代谢活性的影响。 结果： 1．本研究所建立的高效液相色谱方法，可以同时测定6种探针药物咖啡因、 美托洛尔、氯唑沙宗、奥美拉唑、甲苯磺丁脲和咪达唑仑在肝微粒体中的浓度， 各吸收峰分离完全，线性关系良好，准确度、精密度及稳定性均符合生物样本 检测要求，操作简便。 2．低浓度(0．5、1、2、4、8、16I，tmol·L-1)丹参酮IIA对大鼠肝微粒CYPlA2、 CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4酶活性无显著性影响 (胗O．05)，而高浓度(32和96rtmol·L-1)丹参酮IIA对大鼠肝微粒CYPlA2、 CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9和CYP2E1酶活性具有抑制作用(pO．05)。丹参 酮IIA对大鼠肝微粒CYPlA2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1的IC50 天津医科大学硕士学位论文值分别为32．48、34．76、26．12、26．29和26．381．tmol·L～，表示对其具有弱抑制 天津医科大学硕士学位论文 值分别为32．48、34．76、26．12、26．29和26．381．tmol·L～，表示对其具有弱抑制 作用。 结论： 1． 本研究建立的大鼠肝微粒体中的“Cocktail”探针药物法操作简便，精密 度、准确度、灵敏度高，检测周期短，能够同时评价药物在体外对大鼠肝微粒 体6种主要CYP450亚型CYPlA2、CYP2D6、CYP2C1 9、CYP2C9、CYP2E1 和CYP3A4活性的影响。 2． 丹参酮I认在体外大鼠肝微粒孵育体系中对CYPlA2、CYP2D6、 CYP2C19、CYP2C9和CYP2E1的代谢活性具有较弱的抑制作用。临床上通常 不易发生代谢性药物相互作用。 关键词：细胞色素P450酶(CYP450)大鼠肝微粒体‘‘Cocktail’’探针药物法高 效液相色谱丹参酮IIA药物相互作用 天津医科大学硕士学位论文ABSTRACT 天津医科大学硕士学位论文 ABSTRACT objective： To establish a HPLC approach for a Cocktail method which can simultaneously determine the metabolic activities of different CYP isoforms，optimize the rat liver microsomal(RLM)incubation conditions，develop a rat liver microsomal incubation system and evaluate the effects of Tanshinone 11．4 on the metabolic activities of CYP isoforms CYPlA2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1 and CYP3A4 in vitro in RLM，thus providing a guide for clinical tre