低氧对大鼠肺微血管内皮细胞内质网应激性凋亡的影响及intermedin的作用内科学专业论文.docxVIP

温州医学院硕士论文低氧对大鼠肺微血管内皮细胞 温州医学院硕士论文 低氧对大鼠肺微血管内皮细胞 内质网应激性凋亡的影响及intermedin的作用 中文摘要 目的：研究低氧条件下大鼠肺微血管内皮细胞的凋亡是否与内质网应激途径有 关：并探讨新的小分子活性肽intermedin(IMD)对大鼠肺微血管内皮细胞 凋亡的影响。 方法：用抗体磁珠法分离培养原代大鼠肺微血管内皮细胞，取3,--,5代进行试验。 实验分为常氧对照组(N)、低氧实验组(H)、低氧+IMD组(IMD用药 组，IMD终浓度为107mol／L)，每组设立6个复孔。分别放于相应的培养 箱培养48小时，收集上清液和细胞。检测上清液中乳酸脱氢酶(LDH) 的含量作为细胞损伤的指标，Hoechst和TUNEL染色检测凋亡，分光光 度法检测caSpase一3酶活性，实时定量PCR检测caspase．12、GRP78、GRP94 mRNA表达。实验数据用(x士s)表示，并用SPSSl2．0软件进行实验数 据的统计学分析，P0．05有统计学意义。 结果：1、LDH检测结果：与常氧对照组相比，低氧实验组的LDH高76．95％ (尸O．01)；与低氧实验组相比，IMD用药组的LDH低25．96％伙0．01)。 2、Hoechst染色显示：与常氧对照组相比，低氧实验组的凋亡细胞百分率 高168．54％(PO．01)；与低氧实验组相比，IMD用药组的凋亡细胞百 分率低7．0％(户O．01)。 3、TUNEL染色显示：与常氧对照组相比，低氧实验组的凋亡细胞百分率 高240．63％(Po．01)；与低氧实验组相比，IMD用药组的凋亡细胞百 分率低13．46％(PO．01)。 4、分光光度法检测显示：与常氧对照组相比，低氧实验组的caSpase．3 酶活性高130．77％(P0．01)：与低氧实验组相比，IMD用药组的 caSpaSe一3酶活性低42．22％(P0．05)。 5、Real．time PCR检测显示：与常氧对照组相比，低氧实验组的 caSpaSe．12ml斟A表达高42．54％(p0．05)，GRP78 mRNA高60．63％ (尸o．01)，GRP94 mRNA高245．23％(氏0．01)；与低氧实验组相比， IMD用药组的caSpase．12mRNA低23．56％(P0．05)，GRP78 mRNA低 18．14％(尸0．01)，GI冲94mRNA低25．17％(火0．05)。 结论：1、体外离体培养条件下，低氧引起的大鼠肺微血管内皮细胞凋亡与内质 ————————————————————j璺些堕堡主堕窒网应激途径有关。 ————————————————————j璺些堕堡主堕窒 网应激途径有关。 2、IntenIledin有抑制低氧条件下体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞凋亡的 作用，但内质网应激途径可能不是主要的通路。 关键词：低氧；内皮细胞；内质网；凋亡；intenIledin 温州医学院硕士论文Apoptosis 温州医学院硕士论文 Apoptosis Associated with Endoplasmic Reticulum Stress of Pulmonary Microvascular Endothelial Cells in Hypoxic Conditions and the Effect of Intermedin Abstract Objective： 1．To investigate apoptosis associated with endoplasmic reticulum stress of pulmonary microvascular endothelial cells in hypoxie conditions． 2．To investigate the effect of intermedin on the reticulum stress—associated apoptosis of pulmonary microvascular endothelial cells． Methods： The method of antibody magnetic beads was used to separate the generation of pulmonary microvascular endothelial cells on rat．The 3-5 generations of the rat microvascular endothelial cells were taken for the test．We set normal oxygen control group，hypoxia group and hypoxi