乌塌菜种质资源ISSR反应体系的建立及其遗传多样性分析.pdf

目录 摘要 Ⅰ  Abstract Ⅲ  1.文献综述1  1.1乌塌菜简介1  1.1.1乌塌菜的起源和进化 1  1.1.2 乌塌菜的特征特性1  1.1.3乌塌菜的栽培管理2  1.2 乌塌菜种质资源研究现状2  1.3植物遗传多样性研究方法3  1.3.1遗传多样性概述3  1.3.2遗传多样性的研究方法 3  1.4 ISSR 分子标记技术4  1.4.1 ISSR 分子标记技术的原理 4  1.4.2 ISSR 分子标记技术的特点 4  1.4.3 ISSR 分子标记技术的应用 4  2.引言6  2.1研究的目的与意义 6  2.2 主要研究内容6  3.材料及方法 7  3.1材料及来源7  3.2 试剂和仪器8  3.2.1 主要试剂8  3.2.2  主要仪器8  3.3乌塌菜基因组 DNA 的提取和检测8  3.3.1 DNA 的提取8  3.3.2 DNA 的检测9  3.4 乌塌菜 ISSR­PCR扩增反应9  3.4.1 乌塌菜初试扩增程序和反应体系的建立9  3.4.2  乌塌菜 ISSR­PCR 单因素试验9  3.4.3ISSR­PCR 反应体系的正交优化10  3.4.4  退火温度及循环数的优化 11  3.4.5 乌塌菜 ISSR­PCR 反应体系和程序的稳定性检测 11  3.5 乌塌菜 ISSR­PCR扩增条带的统计与分析 11 IV  4.结果与分析12  4.1 乌塌菜 ISSR­PCR扩增反应体系的建立与优化12  4.1.1引物浓度对 ISSR扩增的影响 12  4.1.2 dNTP 浓度对 ISSR扩增的影响12  2+  4.1.3 Mg  浓度对 ISSR扩增的影响13  4.1.4 Taq DNA聚合酶浓度对 ISSR扩增的影响 14  4.1.5ISSR 反应体系的正交试验设计的直观分析 14  4.1.6退火温度及循环数的优化14  4.1.7乌塌菜 ISSR­PCR 体系的验证与检验15  4.1.8 引物的筛选16  4.2 乌塌菜遗传多样性研究17  4.2.1乌塌菜 ISSR­PCR扩增产物的多态性分析 17  4.2.2 ISSR­PCR聚类分析19  4.2.3 48 份乌塌菜的遗传相似系数20  5.讨论25  5.1乌塌菜 ISSR­PCR 体系优化25  5.2 乌塌菜 ISSR­PCR 分子标记26  6.结论27  参考文献 28  致谢 31  附录32  作者简介 33  在读期间公开发表学术论文情况 34 V  1.文献综述 1.1 乌塌菜简介 乌塌菜(Brassica campestris L. ssp. chinensis var. rosularis Tsen)又名塌菜、 塌地松、 塌棵菜、黑菜等，为十字花科(Cruciferae)芸薹属芸薹种白菜亚种的一个变种，以墨绿 [1]  色叶为产品的二年生草本植物。原产中国，主要分布在我国长江流域  。乌塌菜茎叶 肥嫩鲜美，营养丰富，因富含维生素C、钙、铁、磷和镁等矿物质被称为“维他命”菜  [2]  。 1.1.1 乌塌菜的起源和进化 乌塌菜起源于中国，相关记载首见于宋代范成大《田园杂兴》：“拨雪挑来塌地 菘，味如蜜藕更肥浓”，诗中“踏地菘”即乌塌菜，至今已有近千年的栽