分子生物学常用技术与方法框架-上海中医药大学精品课程网.DOCVIP

PAGE PAGE 4 第二版《分子生物学技术在中医药研究中的应用》 教学大纲 方肇勤 上海中医药大学基础医学院实验中医学教研室 （2011/ 一、前言 分子生物学实验技术的发展日新月异，中医药的研发中已愈来愈广泛地采用了分子生物学技术。然而，与国内外西医界相比，分子生物学技术在中医药研发中的应用还存在很大的差距，突出表现在知识普及不够、研发投入不足和技术使用不当，该技术在中医药研发中能否用、为何用、如何用的问题还没有得到根本的解决。 为此，1996年，我们编写了《分子生物学常用技术与方法》；2002年，我们编写并正式出版了《分子生物学技术在中医药研究中的应用》。鉴于近年来分子生物学技术又有了长足的发展，而中医药研发工作对该技术的需求日益增加，我们对原著进行了调整与充实。主要包括8个部分： 1．绪论。重点介绍分子生物学技术在中医药研发中应用的现状，深入浅出地介绍如何用和怎样用，以及本著各章节的结构与关系。 2．分子生物学常用基本技术。介绍重组质粒、质粒转化大肠杆菌、阳性单菌落扩增与小量DNA制备、酶切重组质粒和电泳分离所插入的DNA、从凝胶中回收DNA、大量质粒DNA制备、哺乳类动物细胞的培养、植物细胞悬浮培养技术。 3．DNA的研究方法。介绍哺乳类动物基因组DNA的提取、植物基因组DNA的提取、基因组文库的建立与筛选、Southern blot、PCR、DNA双脱氧链终止法测序、动植物药材的ISSR指纹图谱技术、中药RAPD指纹图谱技术。 4．RNA的研究方法。介绍组织总RNA提取、mRNA的分离、Northern blot、RT-PCR、ABI荧光实时定量PCR、原位杂交、基因芯片、cDNA Array、DD-PCR、cDNA库建立、基因全序列cDNA库筛选、RACE-PCR。 5．蛋白质的研究方法。介绍哺乳类动物组织蛋白质的提取、植物组织蛋白质的提取、Western blot、ELISA、免疫组织化学、单克隆抗体制备、蛋白质双向电泳。 6．基因功能与表达调控的研究方法。介绍RNAi、Small RNA的提取与分析、报道基因与基因调控元件的检测、点突变PCR、基因敲除技术、Footprint、凝胶阻滞分析、植物细胞的基因转化。 7．分子生物学常用网络资源及利用。介绍美国国家生物技术信息中心（NCBI）、GenBank数据库查询与搜索、BLAST、EST的电子延伸、cDNA序列的蛋白阅读框架分析（ORF）、染色体定位及其在机体各组织中的表达预测、PCR引物或序列寡核苷酸探针的在线设计、蛋白质分析。 8．附录。介绍分子生物学实验常用仪器设备、常用生物学数据、常用载体、分子克隆常用酶、常用储存液的配制、常用液体培养基、常用缓冲液、常用酸碱溶液的浓度与分子量、不同浓度酸碱液的pH值、核酸的纯化（用酚/氯仿抽提）、核酸浓缩、分光光度法测定DNA及RNA含量、Sephadex 的水化、放射性度量单位和数据、科学单位、离心速度和离心力换算、英汉对照等。 鉴于我校业已开设《分子生物学》等理论课，业已对分子生物学理论作了系统的介绍，作为实验中医学国家精品课程的重要组成课程之一，本课程重点介绍分子生物学技术在中医药研究中的应用，深入浅出地介绍如何用和怎样用，以及本著各章节的结构与关系；在技术培训方面，重点开展：重组质粒、质粒转化大肠杆菌、阳性单菌落扩增与小量DNA制备、酶切重组质粒和电泳分离所插入的DNA、从凝胶中回收DNA，以及组织总RNA提取、RT-PCR等实验，多媒体介绍Northern blot；以及概要介绍分子生物学常用基本技术、DNA的研究方法、RNA的研究方法、蛋白质的研究方法、基因功能与表达调控的研究方法等，希望对学生有所帮助。 二、教学内容和要求 采用理论教学与实验培训结合方式。因受到课时数和教学经费的限制，教材中大多实验不予开展课堂讲授和教学实验，建议学生自学及开展有关实验时参考。具体教学内容和要求如下： （一）第一章 绪论 [目的要求] 1．了解分子生物学技术在中医药研发中的实例，举一反三。 2．了解分子生物学技术在中医药研究中的现状，拓展思路。 3．了解中医药研究中经常使用的分子生物学技术及教学安排。 4．了解加强分子生物学技术在中医药研发中的应用，是新时期中医药继承与发展的迫切需要。 [教学内容] 1．重点介绍分子生物学技术在中医药研发中的实例，举一反三。 2．简要介绍分子生物学技术在中医药研究中的现状，拓展思路。 3．介绍中医药研究中经常使用的分子生物学技术及教学安排，明确教学设计目的。 （二）第二章 分子生物学常用基本技术 [目的要求] 实验1了解分子生物学的常用载体质粒及其特征，掌握重组质粒的原理与方法。 实验2 掌握质粒转化大肠杆菌的原理与方法。 实验3 掌握阳性单菌落扩增与小量DNA制备的原理与方