生物通2008技术点评慢病毒载体.PDF

生物通 2008 技术点评：慢病毒载体 近几年来，慢病毒载体因其独特的优势，逐渐成为表达载体中的大热。慢病毒载体与其他表达载 体相比，最大的优势是它们能感染分裂和非分裂的细胞。这对于众多干细胞和难转染细胞的研究者而 言，可谓是一根及时的救命稻草，能解决令人头疼的转染效率低的问题。 慢病毒（lentivirus）是反转录病毒的一种， 染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、 需要相对较长的孵育时间，所以称之为“慢”病毒， 心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种 lenti 在拉丁文中就是慢的意思。它包括 HIV、FIV 类型的细胞，又很少引发机体的免疫反应，能达 （猫免疫缺陷病毒）和其他病毒。 到良好的基因治疗效果，具有广阔的应用前景。 如果你的实验需要长期基因表达或沉默，而目的 先来谈谈反转录病毒吧。反转录病毒是一类 细胞又很难转染，那慢病毒可以说是非常理想的 正链 RNA 病毒，分为顺式功能基因和反式功能 选择。野生型的 HIV 大小约为 9.8 kb，故插入片 基因。由于反转录病毒包膜上有 env 编码的糖 段一般在 4-5 kb 左右，这对于大部分的实验来 蛋白，能被许多哺乳动物细胞膜上特异性受体所 说应该够用了。 识别，并能介导反转录病毒的遗传物质高效进入 宿主细胞内；并且病毒在自身表达的整合酶催化 慢病毒载体的发展经历了 3 个阶段：第一代 作用下可高效地整合进宿主细胞染色体中，这有 慢病毒载体系统是以三质粒系统为代表。在构建 逆转录和整合所 利于外源基因在宿主细胞的永久表达；成熟的病 时把 HIV-1 基因组中进行包装、 毒颗粒以芽生的方式进入细胞培养液上清液中， 需的顺式作用元件与编码反式作用蛋白的序列 易于和宿主细胞分离。但传统的反转录病毒载体 分离，分别构建在三个独立的质粒表达系统上， 没有组织特异性，只能感染处于分裂期的细胞， 即包装质粒(一个强启动子如 CMV 作用下，控制 而且滴度低，并可能产生具有复制能力的反转录 除 env 以外所有病毒结构基因的表达)、包膜质 病毒，因此不能作为理想的表达载体。 粒(VSV-G 基因)和载体质粒( 目的基因)，用这三 种质粒共同转染包装细胞如人胚肾 293T 细胞， 慢病毒病毒源于反转录病毒，但又有所不 在细胞上清中即可收获只有一次感染能力、而无 同。市场上的慢病毒是由人类免疫缺陷病毒 复制能力的慢病毒颗粒。第一代慢病毒载体系统 （HIV），通过去除env、vif 、vpr 、vpu 、nef 的特点是在构建三种包装质粒时，为了降低产生 等毒性基因改造而来。复制缺陷型 HIV 载体通 有复制能力的病毒的可能性，尽可能减少三种质 常用水泡口炎病毒（vesicular stomatitis virus ） 粒之间的同源序列，但包装质粒中仍然保留了 G 糖蛋白（VSV-G ）来代替 HIV-1