高级动物生物化学第一、二、三章.pptVIP

蛋白质中常见氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 六、色氨酸吲哚基的修饰： 1. N—溴琥珀酰亚胺（NBS） 2. 2—羟—5—硝基苄基溴 九、 丝氨酸羟基的修饰：甲苯磺酰氯（PMSF） 七、 酪氨酸酚羟基的修饰：四硝基甲烷（C(NO2)4) 八、 甲硫氨酸甲硫基的修饰： 碘乙酸等 常用主要修饰剂的专一性 试 剂 醋酸酐 酰基酸酐 修 饰 侧 链 醛 四硝基甲烷 N-溴琥珀酰亚胺 碳二亚胺 苯异硫氰 三硝基苯磺酸 焦碳酸二乙酯 碘乙酸 环乙烯亚胺 苯甲磺酰氯 Lys Glu Cys Arg Ser His Tyr Trp Met × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × 马来酰胺 §4 蛋白质肽链交联 有些试剂具有两个功能基团或反应部位。可以使两个相隔较近的氨基酸残基间进行搭桥，从而形成多肽链或多肽间的交联，而不引起蛋白质构象的重大变化。这种试剂称为双功能试剂。这一技术常用于蛋白质构象和蛋白质间相互作用的研究。 、设计或选择交联剂要考虑的因素 1. 反应的专一性 现在大多数交联剂能与蛋白质氨基或巯基反应。根据反应类型，交联剂分两类： 同型双功能试剂 Pr—NH2?H2N—Pr； Pr –SH ? HS—Pr 异型双功能试剂 Pr—NH2 ? HS—Pr 2. 交联距离 交联距离是一个重要参数。随着交联剂两个功能基之间距离跨度的增加，形成交联的可能性也随之增加。 用一系列具有类似专一性，但跨度不同的交联剂，可获得关于基团空间方位的大量信息。 肽链间进行交联时，必须使用跨度最短的交联剂，否则得不到肽链间的交联。 3. 可裂解性 研制可裂解的交联剂有助于分离交联片段。在这种交联剂的两个功能基之间，含有交联后可在温和条件下被裂解的区域。利用这一特点，结合双向电泳，可以很容易地分离和分析交联的组分。 可裂解型 不可裂解型 二、 交联剂的类型 同型双功能试剂 异型双功能试剂 可被光激活试剂 反应基团 反应基团 间隔基团 同型双功能基团 -(CH2)n-; 非裂解 CH3-O-C- = NH2+ CH3-O-C- = NH2+ -(CH2)n- S-S-(CH2)n-; 可裂解 异型双功能基团 CH3-O-C- = NH2+ 与氨基反应 与氨基反应 -S-S- N 与巯基反应 -(CH2)n-; 非裂解 = O OH (-CH-C-)2 可裂解 光活化双功能基团 N3 OH -(CH2)n-; 非裂解 = O OH (-CH-C-)2 可裂解 -S-S- N CH3-O-C- = NH2+ 光照活化，但没有专一性 1 研究蛋白质的折叠 2 分子间的交联，稳定蛋白质 3 测定蛋白质亚基的数量（SDS—PAGE） 4 其它 三、交联剂的应用 亲和标记又称部位专一性标记，专一性强，是一种特异的化学修饰方法。他是利用酶与底物的亲和性，使用与酶底物类似的修饰剂，对酶活性部位上的氨基酸残基进行共价标记。由于这类的试剂对蛋白质某些特殊部位有亲和性，所以成为“亲合试剂” 亲合试剂分为： 内生亲和试剂: 试剂本身某部分通过化学方法转化为所需反应基团 外生亲和试剂: 试剂+反应中的基团 → 外生亲和试剂 一、内生亲和试剂 如ATP是许多酶的底物，用过碘酸氧化ATP，核糖部分的2，3－键打开，形成含二醛的ATP衍生物。 §5 亲和标记 O 1 5 4 3 2 OH OH CH2 N N NH2 N N H 1 2 3 4 5 6 7 8 9 O Adenosine-5-m