白虎加桂枝汤对热痹模型大鼠特征性甲基化基因表达的.pdf

２０１７年１月 第４２卷第２期 Ｖｏｌ４２，Ｎｏ２ Ｊａｎｕａｒｙ，２０１７ 白虎加桂枝汤对热痹模型大鼠特征性 甲基化基因表达的影响 １，２ １，２ １，２ １，２ １，２ １，２ 陈欢 ，巨少华 ，魏江平 ，付文君 ，郑航 ，徐世军 （１成都中医药大学，四川 成都６１１１３７； ２四川省中药资源系统研究与开发利用国家重点实验室培育基地，四川 成都６１１１３７） ［摘要］　考察湿热环境下热痹模型大鼠特征性甲基化基因及白虎加桂枝汤对热痹特征性甲基化基因的调控作用。采用大鼠 足底注射ＣＦＡ并复合湿热环境制备热痹大鼠模型。造模后第１５天给予白虎加桂枝汤干预治疗３０ｄ。造模后每隔４ｄ检测足 容积，第４５天采用ＨＥ染色法检测大鼠踝关节组织病理学，ＭｅＤＩＰＳｅｑ测序法检测大鼠膝关节滑膜甲基化水平并以取差集的 方法筛选热痹模型特征性甲基化基因，悬浮芯片检测血清中ＩＬ１，ＩＬ１７，ＴＮＦ，ＥＧＦ，ＩＬ１２ｐ７０，ＩＬ４，ＩＬ６及ＩＦＮ含量水平， β α γ ｑＲＴＰＣＲ检测大鼠滑膜特征性甲基化基因ｍＲＮＡ相对表达水平。实验发现，与完全弗氏佐剂性关节炎（ＡＡ）模型组比较，热 痹模型组足肿胀度和病理严重程度仅轻微增加；与空白组比较，２个模型组全基因ＣｐＧ岛均呈低甲基化状态，热痹模型组甲基 化水平最低，且ＡＡ模型组共７０５个差异性甲基化基因，热痹模型组共２４１８个差异性甲基化基因；与ＡＡ模型组比较，热痹模 型组存在１２８７个差异性甲基化基因，其中共９７４个差异性基因甲基化下调，这些差异性基因显著分布于３２个ＫＥＧＧＰａｔｈｗａｙ 中（Ｐ＜００５），此外启动子区上热痹特征性甲基化基因共５２个，其中３６个甲基化下调基因，１６个甲基化上调基因；药物干预 后，白虎加桂枝汤显著改善热痹模型组足肿胀度和病理损伤，且明显降低ＩＬ１，ＴＮＦ，ＥＧＦ，ＶＥＧＦ，ＩＬ１７，ＩＬ１２ｐ７０的含量水 β α 平（Ｐ＜００５），还能抑制热痹特征性甲基化下调基因Ａｈｃｙ及Ｒｐｌ３ｍＲＮＡ的表达，促进热痹特征性甲基化上调基因ＡｇｘｔｍＲＮＡ 的表达水平。可见，热痹模型滑膜基因存在独特的甲基化水平变化，而白虎加桂枝汤可能针对性回调热痹特征性基因的甲基 化水平，达到治疗热痹的作用。 ［关键词］　热痹；ＤＮＡ甲基化；湿热环境；白虎加桂枝汤 ＥｆｆｅｃｔｏｆＢａｉｈｕＧｕｉｚｈｉｄｅｃｏｃｔｉｏｎｏｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｇｅｎｅｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐｙｒｅｔｉｃａｒｔｈｒａｌｇｉａｒａｔｍｏｄｅｌ １，２ １，２ １，２ １，２ １，２ １，２ ＣＨＥＮＨｕａｎ ，ＪＵＳｈａｏｈｕａ ，ＷＥＩＪｉａｎｇｐｉｎｇ ，ＦＵＷｅｎｊｕｎ ，ＺＨＥＮＧＨａｎｇ ，ＸＵＳｈｉｊｕｎ （１ＣｈｅｎｇｄｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１１１３７，Ｃｈｉｎａ； ２ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＥｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＲｅｓｏｕｒｃｅｓｉｎＳｉｃｈｕａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ， Ｃｈｅｎｇｄｕ６１１１３７，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｇｅｎｅｓｏｆｐｙｒｅｔｉｃａｒｔｈｒａｌｇｉａｍｏｄｅｌｉｎｈｏｔａｎｄｄａｍｐｎｅｓｓｅｎｖｉ