青虾泛素特异性蛋白酶9基因Usp9全长.PDFVIP

中国农学通报 2015,31(17):28-37 Chinese Agricultural Science Bulletin 青虾泛素特异性蛋白酶9基因Usp9全长 cDNA序列的克隆及表达分析 1 1 1 1 2 2 2 2 袁 晖 ，周 巧 ，张世勇 ，傅洪拓 , ，孙盛明 ，乔 慧 ，张文宜 1 2 （南京农业大学渔业学院，江苏无锡214081 ；中国水产科学研究院淡水渔业中心，江苏无锡214081 ） 摘 要：本研究首次克隆了青虾的Usp9 (ubiquitin-specific protease 9)基因全长cDNA 序列，并在青虾中使 用荧光定量PCR 技术首次检测了Usp9 基因在不同组织和发育阶段中的表达变化。青虾Usp9 基因 cDNA 全长1259 bp ，包括162 bp 的5 ’UTR ，978 bp 的开放阅读框以及116 bp 的3 ’UTR 。氨基酸序列比 对分析显示，青虾Usp9 蛋白与太平洋牡蛎(Crassostrea gigas) 、凤仙花熊蜂(Bombus impatiens)及灰短尾 负鼠(Monodelphis domestica)的蛋白相似度分别为99% 、97%和95% 。应用MEGA5.1软件对青虾与其他 物种的Usp9 氨基酸进行系统进化树分析，结果表明，青虾Usp9 与同为甲壳纲的钩额型蚤状溞聚为一 支，具有最近的亲缘关系。采用荧光定量PCR 技术检测了Usp9 基因的时空表达，水温28℃时，Usp9 基 因在青虾发育的后幼体发育期第5 天PL5 出现表达高峰。Usp9 基因在6 种成体组织中均有表达，表达 水平依次为：脑＞腹神经＞精巢＞卵巢＞肌肉＞肠。而在雌雄组织差异表达分析表明，精巢中Usp9 基 因表达量比卵巢的比值为2.86，脑组织中雄虾的表达量比雌虾为2.27 ，差异均为极其显著(P＜0.01) 。这 表明Usp9 基因的表达和雄性偏向基因趋势是一致的（雄性表达：雌性表达≥1.5）。本研究为进一步开展 青虾Usp9 基因功能等相关研究奠定了基础，并可为青虾性别的遗传调控机制研究提供参考。 关键词：青虾；泛素特异性蛋白酶9 ；基因克隆；时空表达 中图分类号：S9 文献标志码：A 论文编号：2013-1284 Full-LengthcDNACloningandSpatial-TemporalExpressionAnalysisofUbiquitin-Specific Protease9GeneinOrientalRiverPrawn,Macrobrachiumnipponense 1 1 1 1,2 2 2 2 YuanHui,ZhouQiao,ZhangShiyong,FuHongtuo ,SunShengming,QiaoHui,ZhangWenyi 1 (FisheriesCollege,NanjingAgricultureUniversity,WuxiJiangsu214081; 2FreshwaterFisheriesResearchCenter,ChineseAcademyofFisherySciences,WuxiJiangsu214081) Abstract:Inthisstudy,thefull-lengthcDNAsequencewasclonedandspatial-temporalexpressionpatternof Usp9wasd