血清TTR的表达与结直肠癌转移的相关性研究.docVIP

血清TTR的表达与结直肠癌转移的相关 性研究 ［摘要］目的研究分析结直肠癌转移与血清转甲状腺素蛋白（TTR ）表达之 间的相关性。方法选择2014年1月~ 2015年12月间我院收治的23例结直 肠癌患者进行本次研究,采集其血液样本。根据是否出现了远处转移进行分组, 将其中无远处转移的样本设为对照组，共11例；发生远处转移的样本设为观察 组，共12例。所有样本都采用蛋白免疫印迹方法对TTR表达进行半定量分析。 结果通过计算两组样本的光密度比值,结果显示无远处转移的结直肠癌患者血 清样本（对照组）中TTR的表达量更高，显著高于发生远处转移患者（观察组） 血清TTR表达量，差异有统计学意义（P二0.0230.05 ）。结论 结直肠癌患者 血清TTR的表达水平与肿瘤是否发生转移有相关性，发生远处转移结直肠癌患 者血清TTR表达量显著更低，在今后对结直肠癌浸润与转移水平的评估中JTR 可作为一种肿瘤标志物。 ［关键词］血清TTR ;结直肠癌；相关性；表达水平 转甲状腺素蛋白（TTR）,也被称为〃前白蛋白〃，英文简称PA ,是由4 个相同亚基共同构成的一种四聚体,每个亚基由127个氨基酸组成z其主要功 能是以转运蛋白的身份参与转运甲状腺素、视黄醇，同时TTR还能够体现体内 蛋白的合成情况,当体内蛋白丢失，出现应激状态时，TTR水平会迅速下降，反 之则增高［1］。由于TTR是一种甲状腺素与视黄醇的转运蛋白，所以其表达情况 可体现机体的营养及某些病理改变，可作为预测疾病、判断疾病预后的一项指标 ［2］。为此，我院选取2014年1月~ 2015年12月间所收治的结直肠癌住院患 者进行研究，分析发生远处转移与未发生远处转移患者TTR的表达情况，现将 结果报道如下。 1资料与方法 1.1 一般资料 纳入我院2014年1月~ 2015年12月结直肠癌住院患者23例为硏究对象, 所有患者均经病理确诊，经检查均未发现其他恶性肿瘤与甲状腺代谢疾病。采集 血清样本，其中11例患者未出现远处转移,12例患者伴有远处转移(均属于肝 或者胃转移),患者年龄最小48岁，最大79岁，平均(69.1±3.1)岁，其中 男12例，女11例。全部患者于术前采集血清样本，术前均未进行放射治疗、 化疗与免疫治疗，全部患者临床资料均齐全。血清样本均置于?80。(：保存，采用 全自动生化仪对血清蛋白浓度进行检测。 1.2方法 对23例患者血清采用蛋白免疫印迹半定量检测。①吸取30 pL血清标本， 采用SDS,变性温度设置为100°C ,处理时间设置为18 mino②电泳浓 缩胶电压设置为60 V ,分离胶电压设置为120 V。90 min半干电转仪转膜,采 用封闭液进行封闭，封闭液采用5%脱脂奶粉+PBST ;封闭一抗，封闭液采用抗 体稀释剂，TTR抗体：封闭液=1 : 1000 Pactin抗体：封闭液二1 : 400 ,在4°C 下过夜；PBST: 0.05% Tween + PBS z每20分钟对膜进行一次清洗，共清洗3 次。封闭二抗，TTR抗体与「actin抗体分别采用山羊抗兔(LgGH + L)辣根过 氧化物酶抗体与山羊抗小鼠(LgG H + L )辣根过氧化物酶抗体，其中TTR抗体: 封闭液二1: 1500 , p-actin抗体：封闭液二1 : 2000，将其放置在温室摇床孵育, 时间设置为90 min , PBST每15分钟进行一次洗膜，共进行3次，采用DBA 显色液对膜显色5 min[3]o然后采用分析软件Image J进行条带光密度的计算 和分析。 1.3统计学处理 采用SPSS 21.0统计学软件对获得的计量资料、计数资料进行统计处理， 伴有远处转移组与未发生远处转移组的计量资料采用t检验，计数资料采用X2 检验，显著水平95% , Pv0.05为差异有统计学意义。 2结果 2.1有远处转移与无远处转移组患者血清TTR的表达结果比较 采集11例未发生远处转移的结直肠癌患者血清，实验以5或6例为一组, 采用Western blotting杂交实验对血清中的TTR进行测走，实验以卩-actin为 内参，结果见图lo同样方法，运用杂交实验半定量分析12例发生远处转移结 直肠癌患者血清中TTR表达，结果见图2。 2.2远处转移与无远处转移组结直肠癌患者血清TTR半定量结果比较 比较远处转移与无远处转移组结直肠癌患者血清TTR与卩-actin光密度值z P-actin为参考标准”对比分析两类患者血清TTR的表达量相对变化,同时计 算TTR的变化相对比率。统计学分析显示，比较发生远处转移结直肠癌患者（观 察组）与未出现远处转移结直肠癌患者（对照组）血清中TTR的表达量，前者 为（3.6±0.8 ），后者为（U.4±3.5），发生远处转移结直肠癌患者血清TTR表 达量显著