高GC含量PCR扩增试剂盒.PDFVIP

GC 含量PCR 扩增试剂盒 品编号 B532511 包装规格 50 次/ 100 次 剂盒组成 组分 50 次 100 次 Taq DNA Polymerase (5 U/µl) 25 µl 50 µl 2 × High GC PCR Buffer （with Mg2+ ） 1.25 ml 2.5 ml dNTP (10 mmol/L) 25 µl 50 µl Sterilized ddH O 3.0 ml 5.0 ml 2 h 操作手册 1 份 1 份 c 运输及保存方法 e 低温运输，-20°C 保存。 t 产品介绍 o PCR 反应中有时由于引物或模板中GC 含量过高导致双链变性及引物与模板退火困难。并普通Taq DNA Polymerase 在 i 98°C 的时候很容易就失活，从而导致PCR 失败，生工针对高GC 含量和复杂二级结构的模板设计的PCR buffer 及Hot Taq DNA Polymerase 可增强反应的特异性及稳定性，从而获得好的实验结果。以人类血液基因组DNA 为模板，能够扩增出GC B 含量为78%的DNA 片段。 操作步骤 n 1. 模板DNA准备：基因组DNA，反应体系中模板浓度推荐范围1~10 µg/ml；质粒或噬菌体DNA浓度0.1~1 ng/ml。 o 2. 引物准备：引物浓度推荐范围0.05~1 µmol/L 。 3. 在无菌洁净的PCR管中，参考下面体系配制反应溶液，以50 µl体系为例。 Sterilized ddH O g 补足 2 模板DNA n 10 - 100 ng 2 × High GC PCR Buffer （with Mg2+ ） 25 µl Primer 1 ( 10 µmol/L) a 2 µl Primer 2 ( 10 µmol/L) 2 µl dNTP Mix S 0.5 µl Taq DNA Polymerase 0.5 µl 4. 轻轻混匀后短暂离心。 5. 加适量的矿物油后，置于PCR仪中进行PCR反应。 ¸ 对于有热盖的PCR 仪可不加矿物油。 影响PCR 扩增的因素 模板DNA 50 µl 体系中，通常质粒或噬菌体DNA 模板加入量为0.01~1 ng，基因组DNA 模板加入量为0.05~0.5 µg。 过高的模板量会增加非特异性PCR 产物含量。如果对合成的保真度要求高，模板DNA 增加量要与所需扩 增产物的增加成比例。许多方法都可用来纯化模板DNA，但在纯化DNA 模板中，即使微量的试剂 （如苯 酚、EDTA、蛋白酶k 等）都会强烈抑制Taq 酶活性。使用乙醇沉淀并且反复使用70%的乙醇洗涤处 ， 可有效地去除模板DNA 中所含的微量污染物。 引物 通常PCR 引物的长度为18~25 个碱