牛血清白蛋白手性毛细管整体柱的-生物分子高效分离与表征研究组.PDF

维普资讯 Vo1．26 高等 学校化 学学报 No．5 2005年 5月 CHEM ICAL JOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES 835～ 837 [研究快报] 牛血清白蛋白手性毛细管整体柱的 制备及对映体的分离 严丽娟h，张庆合h。，张维冰 ，冯钰祥 ， 张丽华 ，李 彤h。，张玉奎 (1．中国科学院大连化学物理研究所 ，国家色谱研究分析中心，大连 116023； 2．武汉大学化学与分子科学学院，武汉 430072；3．大连依利特分析仪器有限公司，大连 116011) 关键词 毛细管电色谱；整体柱；溶胶一凝胶法；手性固定相；牛血清白蛋白 中图分类号 0658 文献标识码 A 文章编号 0251．0790(2005)05—0835—03 近年来发展起来的基于原位反应制备的聚合物和硅胶基质毛细管电色谱(CEC)整体柱克服了传统 填充CEC柱制备过程复杂和烧制柱塞困难等不足，极大地推动了CEC技术及应用的发展[hZ]．CEC整 体柱在手性分离中也显示出一定优势，Kang等[3通过在溶胶一凝胶法制备的硅胶整体基质表面涂覆 环糊精衍生物 (Chirasil一一Dex)，分离出一些中性和酸性药物；Chen等4【]在硅胶整体柱上键合L．苯丙 酰胺 ，在配体交换模式下成功地拆分了十二对丹酰化氨基酸消旋体；Kato等[通过混合硅溶胶与 BSA，制备了包覆型硅胶基质整体柱，分离了色氨酸对映体． 本组采用溶胶．凝胶法结合超分子模板技术制备了含有氨基的有机一无机复合基质CEC整体柱，研 究了整体柱的物理化学性能和离子交换性能，该制备方法有效地避免了传统硅胶基质整体柱化学改性 过程中存在的困难[6]．由于整体柱中含有反应活性很高的氨基，故易于进一步修饰引入新的选择性 基团，满足不同分离的需要． 本文以四乙氧基硅烷(TEOS)和3一氨丙基三乙氧基硅烷 (APTES)为反应前体，采用溶胶一凝胶法 合成了含有氨丙基官能团的硅胶基质整体固定相，并采用偶联戊二醛的方法，通过柱上键合BSA得到 手性整体CEC固定相，对整体柱的孔径分布及手性分离特性进行了研究． 1 实验部分 1．1 仪器与试剂 BeckmanP／ACESystem5010毛细管电泳仪 (美国Beckman公司)；熔融石英毛细 管(75mi．d．×375mO．d．，河北永年光导纤维厂)；P200I型液相色谱泵(大连依利特分析仪器有 限公司)；Nowa4000型高速多分析站比表面积与孔分布测定仪 (美国Quantachrome公司)． 四乙氧基硅烷和3一氨丙基三乙氧基硅烷 (美国Acros公司)；牛血清白蛋白(电泳纯，上海试剂采购 供应站)；D，L一色氨酸(英国普尔BDH化学试剂公司)；硼氢化钠 (瑞士Fluka化学试剂公司)；乙腈 (色 谱纯，西班牙Scharlau公司)；十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、50 戊二醛溶液和其它试剂均购 自北 京化学试剂公司．实验中使用的水由CLEARSG制得．流动相在使用前超声脱气 15min． 1．2 实验过程 氨丙基硅胶整体基质参照文献ET]方法制备，具体过程如下：将 112 L四乙氧基硅烷 (TEOS)、118 L3一氨基丙基三乙氧基硅烷(APTES)、8mg十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、0．17g 无水乙醇和32mg水混合均匀后，用注射器充人预先用碱处理过的毛细管中，两端用聚四氟乙烯管连 接成环形，在常温下反应24h．依次用无水乙醇和水冲洗30min．在氨丙基硅胶整体柱采用戊二醛法 收稿日期：2004一l1—1O． 基金项 目：国家 自然科学基金 (批准号资助． 联系人简介：张庆合(1968年出生)，男。博士。副教授。主要从事分离、分析新技术与新材料的研究 E—mail：zhangqinghe@mail．china．corn 维普资讯 836