用PreDictorplates对MabSelectSuRe的单克隆抗体pH洗脱的高通量.PDF

GE Healthcare 应用文献 28-9277-92AA 高通量工艺开发 用PreDictor plates对MabSelect SuRe 的单克隆抗体 洗脱的高通量筛选 pH 介绍 所需的时间。PreDictor™96孔板分离的原理是 采用批量分离，仅有一个理论塔板，而使用 蛋白 亲和层析介质是工业下游纯化过程中捕 A 传统的层析柱进行纯化时，使用多层理论塔 获单克隆抗体的标准步骤。蛋白A层析步骤是 板精细分离。不管怎样，PreDictor96孔板对 一个简单的单元操作，其操作为在近中性pH 于预测层析行为非常有效。本研究重点在于 下进行单克隆抗体 (MAb) 捕获，而在酸性pH 比较由普通层析柱和PreDictor板获得的洗脱 下进行洗脱。这是通用的操作步骤，因为大 条件的不同。 多数的操作参数都可以提前设定，并且对于 大多数的MAb都适用。 然而，对其中一些参数例如洗脱条件则应该 材料和方法 根据每个MAb的本身性质进行进一步的条件优 板试验总览 化。在细胞培养或下游过程中，尤其是在蛋 在 PreDictor板中填入 MabSelect SuRe介质 50 。通过离心，去除平衡、上样、清洗、洗 白 层析柱用低 进行洗脱以及后继的低 µl A PH pH 病毒灭活过程中，抗体的聚合物是需要解决 脱和酸性洗脱过程中的缓冲液。单克隆上样 的一个难题。对低pH敏感以及易形成聚合体 的浓度为.3mg/ml。其中有四种MAb (MAb #, 的单克隆抗体，优化洗脱条件可最低程度地 #3, #4和 #5) 都需要通过上样缓冲液稀释成 降低可能的聚集体，从而获得高的单体回收 的上样浓度。MAb#2是未经纯化的澄清小鼠 率。添加剂如精氨酸，一种洗脱缓冲液，能 骨髓瘤细胞 (NS0) 上清，其浓度为.3mg/ml ， 够增加MAb洗脱过程的pH ，从而防止聚集体 其初始物质可直接上样。所有孔的平衡、上 的形成 ( )。 样、清洗和酸性洗脱的缓冲液均一致，洗脱 过程则根据图 中 板设计采用不同  PreDictor PH 本应用文献中报道，使用PreDictor™96孔板填 的20mM柠檬酸钠，探索pH范围在5.8-3.0之 充蛋白 衍生层析介质 分离 间，以0.2为单位改变。为了方便，洗脱缓冲 A MabSelect SuRe™ 五种不同的MAb时的pH洗脱条件进行筛选。 液在进行板试验前根据板设计预先加入不同 孔板中 使用深孔板作为缓冲液的容器 。这一 使用PreDictor™96孔板层析介质筛选纯化工艺 (