基于阳离子荧光共轭聚合物和核酸适体探针的-中国科技论文在线.PDF

中国科技论文在线 Vo l. 30 高 等 学 校 化 学 学 报 No. 5 2009 年 5 月 　　　　　CHEM ICAL JOURNAL OF CH IN ESE UN IV ER SITIES　　　　　 　 899 ～902 　 基于阳离子荧光共轭聚合物和核酸 适体探针的蛋白质检测新方法 羊小海 , 王胜锋 , 王柯敏 , 罗晓明 , 谭蔚泓 , 崔 　亮 ( 湖南大学化学生物传感与计量学国家重点实验室 , 化学化工学院 , 生物医学工程中心 , 生物纳米与分子工程湖南省重点实验室 , 长沙 4 10082) 摘要 　以核酸适体为识别分子 , 阳离子荧光共轭聚合物为报告分子 , 建立了一种蛋白质检测新方法. 修饰有 荧光熄灭基团的核酸适体探针通过静电作用与阳离子荧光共轭聚合物结合 , 导致后者荧光熄灭. 当加入靶 蛋白后 , 核酸适体探针与其特异性结合 , 荧光熄灭基团与阳离子荧光共轭聚合物远离 , 聚合物荧光信号得以 恢复. 实验结果表明 , 荧光恢复程度与靶蛋 白的浓度正相关. 采用该方法检测凝血酶的线性范围为 17 ～ 40 nmo l/L. 关键词 　核酸适体 ; 凝血酶 ; 阳离子共轭聚合物 ; 荧光检测 中图分类号 　O657　　　　文献标识码 　A 　　　　文章编号 (2009) ( ) ( ) [ 1, 2 ] 核酸适体 Ap tam er 是经体外人工进化程序 SELEX 筛选得到的寡聚核苷酸片段. 它作为一 种新型的分子识别元件 , 不仅能高效 、特异地结合各种配体 , 还具有易合成 、易储存和稳定性好等优 点 , 在蛋白质研究中显示出了良好的应用潜力 [ 3～5 ] . 然而核酸适体本身不具有显示信号的功能 , 需通 过其他手段如荧光标记等产生信号. 目前基于信号核酸适体对蛋白质的检测方法通常是直接在核酸适 体上共价修饰荧光基团 , 利用它与靶分子结合时荧光信号的变化实现对靶分子的检测. ( ) 阳离子型共轭聚合物 Cational conjugated po lym er, CCP 作为一种新型的荧光分子 , 其独特的共轭 骨架结构使其具有一些传统荧光基团不具备的优点[ 6, 7 ] . 首先是它的摩尔吸光系数大 , 荧光量子产率 较高 ; 其次是共轭聚合物具有分子导线的功能 , 能够实现荧光信号的放大 ; 另外其侧链上的正电荷可 静电吸附核酸等分子 , 产生明显的光谱变化 , 不必通过分子间的共价连接即可实现信号转换 , 指示 目 标物的存在. 近年来 , 许多研究小组将阳离子型共轭聚合物与分子识别元件结合并应用于生物化学检 测领域 , 取得了较好的结果 [ 8～10 ] . 本文以凝血酶作为 目标蛋白, 阳离子荧光共轭聚合物为信号分子 , 发展了一种简单 、灵敏的蛋白 质检测新方法. 将核酸适体探针修饰上熄灭基团 , 通过静电作用结合阳离子共轭聚合物并猝灭其荧 光 ; 当凝血酶与核酸适体特异性结合后 , 阳离子共轭聚合物得以释放 , 从而荧光被恢复 , 荧光恢复程 度与凝血酶的浓度正相关. 该方法避免了荧光分子与核酸探针的共价连接 , 同时又结合了共轭聚合物 和核酸适体高灵敏和高