取试验菌各01ml含菌数不大于100cfu分别涂布于被检培养基和对照.PPTVIP

微生物检验培养基质量控制技术 浙江省食品药品检验所抗生素室 李珏 2009.6.30 培养基质量的重要性 培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。 主 要 内 容 培养基制备、使用、贮存中的注意事项 培养基质量控制 2010版药典附录 实例（培养基质量对实验结果的影响） CHP与USP的异同点 同行的方法介绍 新技术 部分菌种在培养基上的典型特征 培养基制备过程中的注意事项 培养基的水化 培养基水化时不得用铜锅或铁锅,以防有离 子混入培养基中,影响微生物的生长； 配制培养基最常用的溶剂是纯化水 ,不能含 有任何可能抑制或影响微生物生长的物质； 培养基制备过程中的注意事项 培养基的溶解 在培养基分装灭菌前,各成分应溶解均匀, 使用电炉等设备煮沸培养基时,应用小火加热,并边加热边搅拌,避免培养基焦化或爆沸溢出。 培养基制备过程中的注意事项 培养基的灭菌 已配制好的培养基必须立即灭菌 湿热灭菌必须严格控制灭菌温度和时间 培养基制备过程中的注意事项 培养基的pH 微生物必须在适宜的pH范围内才能正常生长繁殖 或体现其生物特性。 调整培养基的pH,应用1 mol/LNaOH或1 mol/L HCl调整pH，一般灭菌前比最终pH高0.2～0.3。 培养基制备过程中的注意事项 培养基的保温 灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度,避免长时间保存在灭菌锅内,造成过度灭菌,影响培养基的营养成分或选择性效果。 培养基使用过程中的注意事项 培养基的接种 平板在接种使用时,表面必须无明 显潮湿水珠； 对于保存的培养基,需待温度回复 至室温后才可使用,并且使用前应 检查； 培养基贮存过程中的注意事项 干燥培养基 应遵循先入先出的原则； 贮存于阴凉干燥处,避免强光直射； 培养基贮存过程中的注意事项 已配制的培养基 建议平板倾注后立即使用； 在平板上标上制备日期和/或有效期 和名称； 固体培养基灭菌后的再融化只允许 一次 ； 实 例 三糖铁培养基（TSI） 未校正pH时，不同厂家的TSI培养基产硫化氢强度不一； 校正pH7.5后，各培养基硫化氢反应均有改善,不同厂家的TSI培养基产硫化氢强度仍不相同； 实 例 三糖铁培养基（TSI） 由于培养基pH太低, 本身就是黄色,细菌生长后下层仍为黄色, 而斜面变为橙红色,易误判断为下层“ 变为黄色” 。由此定为发酵菌，造成误判； 培养基质量控制（2010版药典） 培养基适用性检查 同行的方法介绍 液体培养基 采用定量稀释法,用目标菌和杂菌的混合 菌株评价选择性增菌培养基的选择性； 利用OD 值评价液体培养基生长率； 同行的方法介绍 分值计算 质量比较 新技术介绍 BioBall 是一个很小的水溶性球状物，包含 了数量精确的微生物个体，它可以 使微生物质控中的定量控制达到非 常高的精确度。 新技术介绍 BioBall 目前可以提供超过25种菌株； 可应用于培养基质控、方法验证等 需要定量质控的各个领域； 新技术介绍 BioBall SingleShot 提供1次精确接种量 BioBall MultiShot-550 提供10次精确接种量 新技术介绍 BioBall SingleShot 每个BioBall SingleShot都含28至33cfu； 标准误差小于或等于3cfu； 新技术介绍 BioBall与常规稀释法相比的优势 使用方便； 精确的cfu数量； 不同批次间cfu数量稳定； 减少了由于接种量的变化，造成的质控失 败的风险； 典型特征 典型特征 典型特征 典型特征 典型特征 典型特征 大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征 黑曲霉和白色念珠菌在玫瑰红钠琼脂上典型特征 金黄色葡萄球菌在甘露醇氯化钠琼脂上典型特征 沙门氏菌在SS琼脂上典型特征 沙门氏菌在BS琼脂上典型特征 * * 计数培养基 控制菌检查用 培养基 计数培养基适用性检查 对照培养基 系指按培养基处方特别制备、质量优良的培养基，用于培养基适用性检查。由中国药品生物制品检定所研制及分发。 计数培养基适用性检查 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌