氧化石墨烯对聚合酶链式反应扩增效率灵敏度和特异性的-环境化学.PDFVIP

第３６卷　 第４期 环　 境　 化　 学 Ｖｏｌ． ３６，Ｎｏ．４ ２０１７年　 　 ４月 ＥＮＶＩＲＯＮＭＥＮＴＡＬ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ Ａｐｒｉｌ ２０１７ ＤＯＩ：１０．７５２４／ｊ．ｉｓｓｎ．０２５４⁃６１０８．２０１７．０４．２０１６０７２２０３ 蒋城，杨中柱，赵美莲，等．氧化石墨烯对聚合酶链式反应扩增效率、灵敏度和特异性的影响［Ｊ］．环境化学，２０１７，３６（４）：７２４⁃７２９． ＪＩＡＮＧ Ｃｈｅｎｇ，ＹＡＮＧ Ｚｈｏｎｇｚｈｕ，ＺＨＡＯ Ｍｅｉｌｉａｎ，ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｇｒａｐｈｅｎｅ ｏｘｉｄｅ ｏｎ ｔｈｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ， ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１７，３６（４）：７２４⁃７２９． 氧化石墨烯对聚合酶链式反应扩增效率、 灵敏度和特异性的影响∗ 蒋　 城　 杨中柱　 赵美莲　 宋　 瑱∗∗ （成都中医药大学医学技术学院，成都，６１１１３７） 摘　 要　 以人类基因组ＤＮＡ和志贺氏菌粗制裂解菌液为模板，扩增 １１５ ｂｐ 的Ａｌｕ基因片段和４０２ ｂｐ 的ｉｐａＨ 基因片段．通过设置氧化石墨烯（Ｇｒａｐｈｅｎｅ Ｏｘｉｄｅ，ＧＯ）和模板的浓度为变量，分别研究了氧化石墨烯对聚合酶 链式反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）扩增效率和灵敏度的影响；运用多轮ＰＣＲ扩增方法研究了氧化石 墨烯对聚合酶链式反应扩增特异性的影响．结果显示，氧化石墨烯有效提高ＰＣＲ扩增效率的范围为９—１４倍， 提高ＰＣＲ灵敏度一个数量级以及增加多轮 ＰＣＲ 扩增中的两轮扩增反应．从原子力显微镜（Ａｔｏｍｉｃ ｆｏｒｃｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ，ＡＦＭ）的结果可以看出，本文制备的氧化石墨烯片层厚度主要集中在０．５—０．８ｎｍ，少数大于１ｎｍ， －１ 总体具有较大的比表面积．除此之外，本文还发现当氧化石墨烯浓度到达 μｇ·μＬ 后，引物二聚体与氧化石墨 烯的浓度呈正比，说明氧化石墨烯优化ＰＣＲ的主要影响因素是其与引物的相互作用． 关键词　 氧化石墨烯，聚合酶链式反应，扩增效率，灵敏度，特异性． Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｇｒａｐｈｅｎｅ ｏｘｉｄｅ ｏｎ ｔｈｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ， ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ＪＩＡＮＧ Ｃｈｅｎｇ　 　 ＹＡＮＧＺｈｏｎｇｚｈｕ　 　 ＺＨＡＯＭｅｉｌｉａｎ　 　 ＳＯＮＧＺｈｅｎ∗∗ （Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｅｎｇｄｕ，６１１１３７，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｇｅｎｏｍｅ ＤＮＡ ａｎｄ ｃｒｕｄｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｌｙｓａｔｅｓ ｏｆ Ｓｈｉｇｅｌｌａ ａｓ ｔｅｍｐｌａｔｅｓ， １１５ ｂｐＡｌｕ ｇｅｎｅ ａｎｄ４０２ ｂｐ ｉｐａＨ ｇｅｎｅｗｅｒｅ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｇｒａｐｈｅｎｅ ｏｘｉｄｅ（ＧＯ）． Ｗｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＧＯ ｏｎ ｔｈｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＰＣＲ） ｒｅｇａｒｄｉｎｇ ｉｔｓ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ