人CXCL4蛋白原核表达与纯化.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１６，３６（１）：７１３ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 人ＣＸＣＬ４蛋白原核表达与纯化 １ ２ １ １ ２ ２ ２ １ 周　亮 　叶　浩 　周　? 　关　文 　李京敬 　郜　尽 　韩　伟 　俞　雁 （１上海交通大学农业与生物学院　上海市兽医生物技术重点实验室　上海　２００２４０） （２上海交通大学药学院　再生组学课题组　上海　２００２４０） 摘要　ＣＸＣＬ４又名血小板因子４（ＰＦ４），属于ＣＸＣ趋化因子亚家族，能够广谱的作用于多种细胞， 在炎症，凝血等众多生理及病理反应中发挥重要作用。将ＣＸＣＬ４全长基因构建到原核表达载体 ｐＥＴ４３．１ａ（＋），利用大肠杆菌系统表达，继而纯化获得高纯度的目的蛋白。实验表明重组人 ＣＸＣＬ４蛋白可以有效抑制人肾癌细胞增殖，具有生物学活性。重组人 ＣＸＣＬ４原核表达与纯化方 法的建立将有助于其生物学结构与功能的研究，并且对趋化因子家族其它蛋白质的表达与纯化 具有参考价值。 关键词　ＣＸＣＬ４　原核表达　纯化　蛋白质活性 中图分类号　Ｑ４９３．２ 　　ＣＸＣＬ４又名血小板因子４（ＰＦ４），早在 １９５５年作 颗粒中，当血小板被激活时，ＣＸＣＬ４从血小板 颗粒中 α ［１］ ［６］ 为一种具有抗肝素活性的血小板蛋白被发现 。它是 释放出来 。正常人血浆中ＣＸＣＬ４含量低至（１．８±１） 趋化因子大家族中的首个成员，属于ＥＬＲＣＸＣ趋化因 ｎｇ／ｍｌ，然而正常人血清中ＣＸＣＬ４含量可高达数千倍 ６ （近５ｇ／ｍｌ），人血小板中ＣＸＣＬ４含量为７～２２ｎｇ／１０ 子亚家族。人ＣＸＣＬ４（ｈＣＸＣＬ４）编码基因位于４号染 μ ［７］ 色体ＧＲＯ区域中的ｑ１３．１位置，与其他大多数ＣＸＣ趋 个血小板 。此外，其他细胞类型，如平滑肌细胞、小 化因子基因含有４个外显子和３个内含子不同，ＣＸＣＬ４ ［８１０］ 神经胶质细胞、巨噬细胞或Ｔ细胞 也都可以表达 ［２］ 只含有３个外显子和２个内含子，全长大约１０００ｂｐ 。 ＣＸＣＬ４，但这些细胞表达ＣＸＣＬ４的量比血小板中的低 全长ｈＣＸＣＬ４包括信号肽在内共含有１０１个氨基酸，成 很多。 熟的ｈＣＸＣＬ４单体是一个含有７０个氨基酸的多肽链， 　　在过去几十年中，ＣＸＣＬ４已被报道可广泛作用于 分子质量约为７．８ｋＤａ，其中包含了可形成２对二硫键 不同类型的细胞，包括单核细胞、中性粒细胞、内皮细 胞、 ［１１］ 的４个半胱氨酸和１个酪氨酸残基，但是不含甲硫氨 Ｔ细胞 等，产生各种生物学效应。一方面， ［３］ ＣＸＣＬ４介导一些快速的生物学反应，如直接激活中性 酸、色氨酸和苯丙氨酸残基 。ＣＸＣＬ４与ＣＸＣ趋化因