流式细胞仪结果分析报告模板.pptVIP

第四节 在免疫学检验中的应用 流式细胞术目前已广泛地被应用于免疫学基础研究和逐步进入临床应用各方面，用流式细胞仪对细胞表面的抗原成分进行标记分析，可区别多种细胞的特性，为细胞免疫的研究增加了有效的手段和帮助。 T淋巴细胞及其亚群分析 Th(CD3+CD4+CD8-T); Tc(CD3+CD4-CD8+T) B淋巴细胞及其亚群分析 B1(CD19+CD5+):产生IgM型自身抗体, 参与免疫调节、与自身免疫病的发生有关 B2(CD19+CD5-):受外来抗原刺激, 产生高亲和性特异性抗体 NK细胞分析 NK(CD3-CD16+CD56+) 一、淋巴细胞及其亚群的分析 二、淋巴细胞功能分析 细胞介导细胞毒性试验(死细胞与活细胞比例) 细胞内细胞因子测定 三、淋巴造血系统及白血病免疫分型 对淋巴瘤和白血病进行多色免疫分型 用于选择化疗方案、判断预后及检出微小残留病变 CD4+Th细胞、CD4+/CD8+比例 MDR(+)表示对化疗药物耐药 四、肿瘤耐药基因分析 五、AIDS病检测中的应用 HLA-B27可出现在58%～97%的强直性脊椎炎(As) 患者 六、自身免疫病相关HLA抗原分析 七、移植免疫中的应用 FCM作为一个强大的技术平台，已应用于多个领域，其在移植免疫分析中的应用也越来越广泛。目前移植免疫中的FCM应用主要包括流式细胞术的交叉配型（Flow cytometry cross-matching, FCXM）和群体反应性抗体（Panel reactive antibody, PRA）检测。 思考题 流式细胞仪的分析检测原理是什么？ 流式细胞仪分析中前向散射光、侧向散射光和荧光的检测意义。 何谓荧光补偿？何谓“液相芯片”技术？ 细胞分选的基本原理。 FCM分析中有哪些数据显示方式，如何解读结果及其设门分析的意义？ 如何进行FCM分析检测样品的制备？ 流式细胞分析前如何验证仪器工作状态，采用何种校正物？ 流式细胞免疫分析的质量控制包括哪些方面？ 流式细胞术有哪些临床应用价值？ 流式细胞仪分析中常见的荧光素有那些？他们的特性如何？ 小 结 流式细胞术（FCM）是在保持细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下，从分子水平上获取多种信号实现对单个细胞进行定量分析或纯化分选。 FCM分析中前向散射光反映颗粒的大小；侧向散射光反映颗粒内部结构复杂程度、表面的光滑程度；荧光反映颗粒被染上荧光部分数量的多少，根据其标记的抗原分子不同，即反映了不同抗原分子的表达情况。 同型对照为免疫荧光标记中的阴性对照，可使荧光标记单抗的信号保持其特异性。 对各项工作环节和仪器性能进行严格的质量控制和规范化操作，是保证FCM分析中各项检测数据和指标可靠性的关键。 谢谢大家！ 感谢您的观看！ 由一维参数(散射光或荧光)与颗粒计数(COUNT)构成，反映同样散射光或荧光强度的颗粒数量的多少。 （一）单参数直方图 单参数直方图 细胞相对数量 信道(channel ) 双参数直方图：纵轴和横轴分别代表被测量细胞的两个测量参数，根据这两个参数就可以确定细胞在图上的表达位置。 双参数信号通常采用对数信号，最常用的是点密图，在图中，每个点代表一个细胞，点图利用颗粒密度反映同样散射光或荧光强度的颗粒数量的多少。 （二）双参数直方图 1.双参数直方图点图 绿色荧光强度 红色荧光强度 双参数直方图点图 2. 二维等高图 由类似地图上的等高线组成，其本质也是双参数直方图。 等高图上每一条连续曲线上具有相同的细胞相对或绝对数，即“等高”。 曲线层次越高(越里面的线) 所代表的细胞数愈多。 等高线越密集则表示细胞数变化率越大。 二维等高图 3. 假三维等高图 （三）三参数直方图 多参数分析：当细胞标记了多色荧光，被激发光激发后，得到的荧光信号和散射光信号可根据需要进行组合分析。 （四）流式细胞仪的多参数分析 Gate设置：指在某一张选定参数的直方图上，根据该图的细胞群分布选定其中想要分析的特定细胞群，并要求该样本所有其他参数组合的直方图只体现这群细胞的分布情况。 根据门的形状又分为了线性门、矩形门、圆形门、多边形门、任意形状门和十字门。 三、设门分析技术 A 淋巴细胞 B 单核细胞 C 中性粒细胞 A、B、C均为任意门 线性门 Region设置: 区阈（region, R）与门(gate, G ) 是两个相关的概念，区阈可与门对应，但是也可以包含于门。 D1 CD4+/CD3- D2 CD4+/CD3+ D3 CD4- /CD3- D4 CD4- /CD3+ 如十字门分析时，起就可以由四个区域构成，即G=D1+D2+D3+D4。 第四节 流式细胞仪免疫分析的技术要求 样本制备 标记染色 液相芯片技术 质量控