分子生物学技术实验指导2009版.docVIP

PAGE 1 分子生物学实验指导 2009 实验一 质粒DNA的制备 [原理] 质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定的遗传因子，存在于细菌等细胞中，大小在1—200kb之间，它们为双链闭环状的DNA分子。质粒具有自主复制和转录能力，能在子代细胞中保持恒定的拷贝数并表达其携带的遗传信息，但其复制和转录要利用宿主细胞编码的一些酶和蛋白质，离开宿主细胞就不能存活，而寄主在没有质粒存在时是可以正常生长的。质粒可独立游离在细胞质内，也可以整合到细菌染色体中，其控制的许多生物学功能通常是对宿主细胞的补充。因此，可以认为质粒是一种寄生性的自主复制子。 质粒在细胞内的复制一般分为两种类型：严密控制型（stringent control）和松驰控制型（relaxed control）。前者只在细胞周期的一定阶段进行复制，因此，染色体不复制时，其也不复制；后者在整个细胞周期中随时都可以复制；通常，前者在细胞内只含1个或几个质粒分子，而后者在细胞里有许多拷贝，一般在20个以上，甚至多达数千个。 在基因工程中，通常使用的是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而人工构建的质粒，称为质粒载体，其带有一个或多个选择性标记基因（如抗生素抗性基因）和一个人工合成的含有若干个限制性核酸内切酶识别的位点（多克隆位点）。由于去掉了天然质粒中的大部分序列，一般不含转移所必需的基因，因此不能自行完成从一个细胞