辣椒游离小孢子细胞团培养胚状体形成.pdfVIP

维普资讯 第 40卷 第 6期 分 子 细 胞 生 物 学 报 Vo1．40，No．6 2007年 12月 JournalofMolecularCellBiology December2o07 辣椒游离小孢子细胞团培养的胚状体形成 刘 凡” 赵 泓 陈 斌 张 月云 (北京市农林科学院蔬菜研究中心．北京 100097) 摘要 从预培养 15天后的花药中机械游离小孢子及其细胞团，经28℃液体悬浮暗培养。30天 后 ，获得 了自球形期胚到子叶期胚发育程度不等的各类胚状体。从 12个花药 中可 以形成高达22 个胚状体 ，且子叶期胚的比例约为23％。显微镜检表 明，这些胚状体来 自游离的小孢子细胞 ．经核 的对称分裂形成多核细胞或者早期形成多细胞 团，最后经细胞 的分裂分化形成。胚状体体表具 毛，活力有差异。在适当培养基上，具活力的鱼雷期及子叶期胚状体均能发育成正常植株。7℃、 32℃、35℃8天的胁迫处理均能诱导小孢子胚状体发生。但花药培养中7℃、35℃处理下的出胚率 较 32℃下高，而游离小孢子细胞团培养中以35℃、32℃下较好。7℃处理下获得的胚状体数很少。 对产生这种现象的原 因进行 了探讨。出胚率在基 因型间，不同胁迫处理温度 间表现 明显差异 。而 在温度处理的不 同天数 间差异不明显。流式细胞仪对再生株真叶的DNA含量分析表 明．获得 的 再生株 中具有单倍体、双单倍体以及单倍一双倍嵌合体植株 。本结果为进一步开展辣椒雄性生殖 途径的胚状体发育研究。提高辣椒成熟胚状体 的频率提供 了实验体系。 关键词 ：辣椒 小孢子 胚状体发生 温度胁迫 倍性分析 通过花药或未成熟花粉 (小孢子)培养可 以获 研究提供实验体系。 得单倍体植株 ，进而加倍成为双单倍体材料。这一 1 材料与方法 方面有利于隐性突变或基因重组性状的表达 ．另一 方面可以直接获得纯合材料 ，应用于杂交育种。国 辣椒 1#、3#、10#、13#、17#包含炮椒 、尖椒 、灯 内外利用辣椒花药培养获得抗病材料或优 良品种 笼椒类型，为F1及 F3代材料。其中 1#、3#具有较 已经有不少相关报道 ，如抗 TMV 、疫病 引、黑腐 好的培养能力 ，用来进行条件实验 。供体母株生长 病[材料的选育；优 良品种 “海花三号”的育成 等。 于具防虫网的塑料大棚内．试验在 5月至 9月下旬 辣 椒花药培养 最早见 于 1973年王玉英 及 间进行 。 George等人的工作[6171。之后 1981年 Dumas等对花 花药培养 ：摘取小孢子处于单核后期的花蕾，以 药培养体系有了较大的改进，提高了出胚率8[]。在此 70％乙醇浸 10秒后 ，0．1％升汞振荡灭菌 10min。无 基础上又有许多改进试验 [9-12]。1997年 Ramon等建 菌水清洗4次。剥取花药接种于CP培养基 _8]上，经 立了固液相双层培养体系 ．简化 了培养操作并进一 7℃、32℃或 35℃不 同天数处理后 ，转入 26℃暗培 步提高了出胚率[13]。 养 。8星期后统计出胚花药频率(出胚率=具胚状体 由于游离小孢子培养系统在一些方面较花药 花药数／培养花药总数X100％)。基因型、温度 、时间 培养系统有更大的优越性，人们一直关注该技术 各处理按完全正交实验设计。每处理至少三皿 ，每 的建立，但是辣椒 的游离小孢子培养却 尚未见有 一 实验重复三次 。 成功报道_13]。 游离小孢子及其细胞团培养 ： 自预培养 15天 本研究拟通过游离培养经花药预培养后的小 孢子细胞及细胞团。获得从小孢子发育