递增负荷运动后大鼠心房肌蛋白质组差异性表达研究.pdfVIP

递增负荷运动后大鼠心房肌蛋白质组 差异性表达的研究 王娟 湖南师范大学体育学院，湖南长沙（410012 ） E-mail：wangjuan2006cn@126.com 摘 要：10 只雄性 SD 大鼠，分为运动组（n=5 ）和对照组（n=5 ）。递增运动负荷训练7 周， 力竭运动后6h，运动组和对照组同时麻醉处死。提取心房肌组织的全蛋白，依次对样品蛋白进 行PH 梯度-SDS 双向凝胶电泳分离蛋白、改良考马氏亮蓝方法染色。运用Bio PD quest 图像分 析软件对双向凝胶电泳图谱进行分析。结果：①运动组和对照组蛋白质斑点数目分别是（354±40 ） 个和（382±24 ）个，匹配率分别为（68.67±9.87 ）%和（72.67±8.62 ）% ，相关系数为 0.71。② 共获得具有两倍以上差异性表达的蛋白质点 104 个。③运动后上调两倍以上的蛋白质点66 个， 其中运动后上调五倍以上的蛋白质点18 个，未见运动后新增的蛋白质点。④运动后下调两倍以 上的蛋白质点38 个，其中运动后下调五倍以上的蛋白质点23 个，运动后消失的蛋白质点7 个。 在运动应激状态下，这些差异性表达的蛋白质点为进一步深入研究具有运动性疲劳特征的新的 目标蛋白提供了充分的实验依据。 关键词：蛋白质组；大鼠；心房肌；运动性疲劳；2-DE 0. 引言 蛋白质组学技术是后基因组时代的重要研究工具，它利用高分辨双向电泳等技术对复杂组 织进行蛋白质分离，然后采用生物质谱等技术对蛋白质进行鉴定。通过凝胶图谱的对比研究,从 大量蛋白中直接快捷地筛选出与年龄、性别、疾病和损伤等因素相关的特异蛋白质。但在运动 领域，相关研究报道还比较少。本文运用蛋白质组学的方法与技术，研究 7 周递增运动负荷后， 大鼠心房肌组织中对运动应激具有重要意义的目标蛋白质，从蛋白质组的水平探讨运动性疲劳 发生、发展规律与机制提供重要实验依据。 1. 材料和方法 实验动物：10 只健康雄性 SD 大鼠，平均体质量 250g 。按体重随机配对分为两组，对照租 和运动组各 5 只。10 只雄性 Sprague-Dawley 大鼠购于湖南农业大学实验动物部（许可证号为： SCXX(湘)2006-0001 ），3 个月龄，体质量（252±11 ）g，Ⅱ级试验动物。室温 20～24 ℃，光照 时间 7：00～19：00，分笼饲养，每笼 5 只，自由进食和饮水。适应性喂养 1 周后，10 只大鼠 按体质量和运动能力配对随机分为对照组和运动实验组，每组 5 只。 仪器设备：722 分光光度计，半自动生化分析仪器，固相pH 梯度等电聚焦千胶条(Immobilise dry strip pH3-10、长度 18cm，购自 Amersham 公司) ，IPGphor 等电聚焦电泳系统 (购自 Amershan Pharmacia 公司) ，聚丙烯酰胺凝胶电泳垂直平板电泳槽（购自bio-rad 公司），MDLDI –TOF MS 质谱仪（购自 Bruker Daltonics 公司），图像扫描仪（购自中晶科技）。 试剂：尿素、NP-40 、载体两性电解质(Parmalyte 3-10 )、PMSF、CHAPS、SDS、溴酚蓝、 丙烯酰胺、BIS 均为 Amersham Pharmacia 公司； TEMED ，胰蛋白酶、IAA、TFA 、DTT 、硫 脲购自 Sigma 公司; 低分子量标准蛋白混合物(兔磷酸化酶 B97400;牛血清白蛋白 66700，兔肌动 蛋白 43000，牛碳酸配酶 31000，胰蛋白酶抑制剂20300 ，鸡蛋清溶菌酶 14400)、AP 购自 Bio-rad 公司；硫代硫酸钠购自 Fluka 公司； Bradford 试剂盒、考马斯亮蓝 G-250、巯基乙醇、甘氨酸、 乙腈、碳酸氢氨、铁氰化钾、乙醇、乙酸钠、硝酸银、甲醛、碳酸钠来自国产。 -1- 运动方案：