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- 2019-02-13 发布于上海
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基于MDCK细胞培养的流感疫苗研究-生物工程专业论文
上海交通大学
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上海交通大学工程硕士专业学位论文
上海交通大学工程硕士专业学位论文
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基于 MDCK 细胞培养的流感疫苗研究
摘 要
流行性感冒是人类至今不能有效控制的传染病之一,一直是威 胁全世界人类安全的疾病。虽然有抗病毒药物,但可能会诱导耐药 株,不适合大范围长时间来应对流感病毒。疫苗是预防和控制流感 的重要手段。除了传统的鸡胚制备流感疫苗,传代细胞系如 MDCK 细胞、Vero 细胞、RER.C6 细胞等也被用作制备流感疫苗。MDCK 细胞具有易培养、对多种不同亚型的流感病毒株敏感、病毒用 MDCK 细胞培养的产量高等特点,是作为流感疫苗生产的理想细 胞系。
本文建立了适用于生产的 MDCK 细胞三级种子库,并使用该 种子库开展对于 MDCK 细胞的生长情况的研究。通过对不同血清 比较,葡萄糖浓度调整,确定了在培养瓶中 MDCK 细胞最佳贴壁 生长条件。在此基础上,进一步研究 MDCK 细胞在微载体表面反 应器系统中贴壁生长情况。MDCK 细胞以微载体贴壁生长,在初 始接种细胞密度为 2.0×105cells/mL,在不更换培养基的情况下, 经过 72 小时,细胞密度最高能达到(13.77±0.69)×105cells/mL, 细胞数量扩增了 6.89 倍。另外,对 MDCK 细胞培养流感病毒的条 件进行优化。当细胞培养至 72 小时,按照 M.O.I=0.01 接种流感病 毒,以含 2.5μg/mL TPCK-胰酶的 MEM 培养基培养流感病毒。在 48 小时后,培养基上清中能够获得的流感病毒血凝滴度为 9 log2 HA/50μL。为今后建立以生物反应器微载体系统大规模培养流感疫 苗技术平台奠定了基础。
关键词:流感病毒,MDCK 细胞,微载体,反应器
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RESEARCH OF MDCK CELL CULTURE-BASED INFLUENZA VACCINE PRODUCTION
ABSTRACT
Influenza is one of infectious diseases which humanity has not effectively control. Influenza is a threat to human health worldwide. Although there are antiviral drugs, but drugs may induce drug-resistant strains. It is not suitable for a wide range to resistant to the influenza virus. The vaccine is an important method of prevention and control of influenza. In addition to the traditional chick embryo preparation of influenza vaccine, continuous cell lines such as MDCK cells, Vero cells, RER.C6 cells have also been used in the preparation of influenza vaccine. MDCK cells is easy to culture, sensitive to a variety of different subtypes of influenza virus strains and high yield product of influenza cultured in MDCK cells. It is an ideal cell line for influenza vaccine production.
This article describes the establishment of three levels of MDCK cells and use this seed bank to carry out research on the growth of
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