第4讲--抗体和抗体工程.pptVIP

重组信号序列 (recombination signal sequence，RSS) 遵循7-12/23-9原则 重组激活酶基因(recombination activating gene，RAG) 编码重组激活酶 形成RAG1/RAG2复合物，可特异性识别并在基因片段与7核苷酸之间切断 免疫球蛋白胚系基因的重排及其机制 只有12bp序列才能与 23bp序列形成局部双链DNA 免疫球蛋白编码基因的转录与翻译 受体编辑与受体修正(receptor editing receptor revision) 受体编辑 中枢免疫器官 不成熟B 细胞 不依赖抗原 受体修正 外周免疫器官 成熟B 细胞 抗原刺激 免疫球蛋白编码基因的转录与翻译 膜型Ig和分泌型Ig重链 免疫球蛋白的装配、转运核分泌 IgH和L链mRNA分别粗面内质网大/小核糖体上进行蛋白质多肽的合成 装配方式： H2+L2=H2L2 HL+HL=H2L2 免疫球蛋白的装配、转运核分泌 由J链通过二硫键将二个同源 单体IgA偶联，形成二聚体IgA 二聚体IgA与黏膜上皮细胞基 底面的多聚Ig受体结合，多聚 Ig受体介导sIgA的内化、转运 和分泌。 免疫球蛋白的多样性及其产生机制 免疫球蛋白多样性产生的机制(Ig diversity) 小鼠 人 H l k H l k 组合多样性 1.4×104 6 1.2×103 1.1×104 1.2×102 2×1021 V 300 2 300 65 30 40 D 12 27 J 4 3 4 6 4 5 连接多样性 1.3×105 18 3.6×103 3×107 连接点改变 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 读框移码 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ N-region ＋ － － ＋ － － 体细胞突变 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 总 计 4.7×108 ~1014 免疫球蛋白的多样性及其产生机制 组合造成的多样性(combinational diversity) VJ和VDJ重排多样性 理论上Ig V区基因片段的组合加上轻重链组合后的多样性约为3.2?106 免疫球蛋白多样性产生的机制(Ig diversity) 连接造成的多样性(junctional diversity) Ig 各基因片段之间的连接往往不准确，有插入、替换或缺失核苷酸的情况发生，从而产生新的编码序列，称为连接多样性 免疫球蛋白的多样性及其产生机制 体细胞高频突变造成的多样性 免疫球蛋白多样性产生的机制(Ig diversity) 生发中心母细胞：Centroblast 生发中心细胞：Centrocyte 成熟B细胞—抗原刺激——生发中心 DNA点突变。 3个CDR区，尤其是CDR3 抗体亲和力成熟(affinity maturation) 免疫球蛋白的多样性及其产生机制 免疫球蛋白的类别转换(isotype switch) m/IgM g/IgG 七、 抗体的人工制备 多克隆抗体 天然抗原分子中常含多种不同抗原特异性的抗原表位，以该抗原物质刺激机体免疫系统，体内多个B细胞克隆被激活，产生的抗体中实际上含有针对多种不同抗原表位的免疫球蛋白，是为多克隆抗体。 获得多克隆抗体的途径主要有动物免疫血清、恢复期病人血清或免疫接种人群。 多克隆抗体的优势是：作用全面，具有中和抗原、免疫调理、介导补体介导的细胞毒作用(CDC)、ADCC等重要作用、来源广泛、制备容易； 其缺点是：特异性不高、易发生交叉反应，也不易大量制备，从而应用受限。 单克隆抗体(monoclonal antibody, McAb) 2. 杂交瘤细胞(hybridoma ) 骨髓瘤细胞 — 无限增殖和永生的特性 ； 免疫B细胞 — 合成、分泌特异性抗体。 每个杂交瘤细胞由一个B细胞融合而成，而每个B细胞克隆仅识别一种抗原表位，故经筛选和克隆化的杂交瘤细胞仅能合成及分泌抗单一抗原表位的特异性抗体，是为单克隆抗体。 七、 抗体的人工制备 定义 由单一克隆B细胞杂交瘤产生的，只识别抗原分子 某一 特定抗 原决定簇的特异性抗体。 单克隆抗体(monoclonal antibody, McAb) 3. 杂交瘤技术 PEG融合技术 HAT培养基： 含氨基蝶呤(A)，次黄嘌呤(H) 和胸腺嘧啶核苷(T)。 次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转化酶(HGPRT) DNA合成途径： 从头合成：利用磷酸核糖焦磷酸和尿嘧啶，可被氨基蝶呤(A)阻断； 补救合成：通过HGPRT利用次黄嘌(H)和胸腺嘧啶核苷(T)。 骨髓瘤细胞— 缺乏HGPRT，不能在HAT培养基中生