基于mTOR靶标小豆蔻明抑制肿瘤血管生成及其机制的分析-药理学专业论文.docxVIP

PBS phosphate buffer solution 磷酸盐缓冲溶液 PI3K phosphatidylinositol 3 kinase 磷脂酰肌醇3激酶 PKB/AKT protein kinase B 蛋白激酶B p-mTOR phosphorylation product of mammalian target of rapamycin 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 磷酸化产物 p-S6K1 phosphorylation product of ribosomal protein s6 kinase 40s核糖体蛋白S6激酶 磷酸化产物 RAP rapamycin 雷帕霉素 RNA ribonucleic acid 核糖核酸 RNase ribonucleic inhibitor RNA RNA酶抑制剂 rpm revolutions per minute 转·分-1 RT-PCR reverse transcription polymerase chain reaction 反转录PCR S6K1 ribosomal protein s6 kinase 40s核糖体蛋白S6激酶 SD standard deviation 标准差 SDS sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 s second 秒 Ser serine 丝氨酸 SPSS statistical package for the social science 社会科学统计软件包 TEMED N,N,N,N’-tetramethylethylene dianmine 四甲基乙二胺 TOR target of rapamycin 雷帕霉素靶蛋白 Thr threonine 苏氨酸 Tris tris（hydroxymethyl）aminomethane 三（羟甲基）氨基甲烷 Tyr tyrosine 酪氨酸 VEGF vascular endothelial growth factor 血管内皮生长因子 PAGE PAGE 1 基于 mTOR 靶标小豆蔻明抑制肿瘤血管生成 及其机制的研究 摘 要 目的 血管生成对肿瘤的生长起着重要的作用，抑制肿瘤血管生成是目前抗肿瘤治 疗的主要方法之一。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin， mTOR）是肿瘤生长过程中的重要蛋白，参与调节细胞的代谢和增殖；同时在肿 瘤组织血管生成的调控中起着重要作用。前期研究表明小豆蔻明（Cardamonin， CAR）能够靶向作用于 mTOR 抑制肿瘤生长，但 CAR 是否影响肿瘤血管生成尚 不明确。本课题旨在考察 CAR 是否通过作用于 mTOR 靶标抑制肿瘤血管生成， 并探讨其可能的机制，为开发以 mTOR 为靶标的抗肿瘤药物提供实验依据。 方法 1 实验材料 体外：人卵巢癌细胞株 SKOV3，体内：鸡胚绒毛尿囊膜（chicken embryo allantois membrane，CAM）模型。 2 分组与给药 SKOV3：常氧细胞分为 0.1 % 二甲亚砜（Dimethyl Sulfoxide, DMSO）溶剂 对照组，RAP 组（10-7 mol·L-1），低剂量 CAR 组（3×10-6 mol·L-1）和高剂量 CAR 组（3×10-5 mol·L-1）； CoCl2（1.5×10-4 mol·L-1）模拟缺氧，缺氧细胞分组与常氧 细胞相同。 CAM：分为 PBS 空白组，条件培养液（conditioned medium, CM）模型对照 组，RAP 组（10-5 mol·L-1），低剂量 CAR 组（3×10-4 mol·L-1），中剂量 CAR 组（10-3 mol·L-1）和高剂量 CAR 组（3×10-3 mol·L-1）。 3 测定指标及方法 3.1 显微镜观察细胞形态 3.2 MTT 法测定细胞增殖 3.3 半定量 RT-PCR 法检测缺氧诱导因子 1α（hypoxia-inducible factor 1α, HIF1α）、 缺氧诱导因子 2α（hypoxia-inducible factor 2α, HIF2α）、血管内皮生长因子 （vascular endothelial growth factor，VEGF）的 mRNA 表达 Western Blot 法检测 HIF1α、HIF2α、VEGF、mTOR、p-mTOR、S6K1、p-S6K1 蛋白的表达 CAM 血管计数 结果 1 CoCl2 模拟缺氧状态下 SKOV3 细胞增殖受到明显抑制（P 0.01）。在常氧及模 拟缺氧状态培养时，CAR 可剂量依赖性抑制 SKOV3 细胞增殖； 2 CAR 抑制 mTOR 和 S6K