呋喃它酮代谢物人工抗原的合成及抗体的制备-华南农业大学学报.PDF

　华南农业大学学报　２０１４，３５（２）：１８２３ ｈｔｔｐ： ｘｕｅｂａｏ．ｓｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ ∥ 　ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　　　　　　　　　　　　　　ｄｏｉ：１０．７６７１／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１４１１Ｘ．２０１４．０２．００４ 束建花，郭红艳，王立琦，等．呋喃它酮代谢物人工抗原的合成及抗体的制备［Ｊ］．华南农业大学学报，２０１４，３５（２）：１８２３． 呋喃它酮代谢物人工抗原的合成及抗体的制备 束建花，郭红艳，王立琦，高　艳，曾振灵 （华南农业大学兽医学院，广东广州５１０６４２） 摘要：【目的】建立高灵敏度的呋喃它酮酶联免疫检测方法．【方法】以戊二醛法将呋喃它酮代谢物５－甲基吗啉－３－ 氨基－２－ 唑烷基酮（ＡＭＯＺ）与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）和卵清白蛋白（ＯＶＡ）偶联，再由ＮａＢＨ 还原西佛碱得到结 ４ 构稳定的免疫原ＡＭＯＺＢＳＡ和ＡＭＯＺＯＶＡ；用对醛基苯甲酸（ＣＰＡ）对ＡＭＯＺ进行衍生化，得到衍生物ＣＰＡＭＯＺ，由 质谱鉴定，经Ｎ－羟基琥珀酰亚胺活化酯法将 ＣＰＡＭＯＺ与ＢＳＡ和ＯＶＡ偶联得到免疫原 ＣＰＡＭＯＺＢＳＡ和包被原 ＣＰＡＭＯＺＯＶＡ．经紫外扫描鉴定表明人工抗原合成成功．免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，ｉｃＥＬＩＳＡ方法测定鼠血清多克隆抗体对 ＡＭＯＺ和ＮＰＡＭＯＺ的特异性．【结果和结论】结果显示 ＣＰＡＭＯＺＢＳＡ免疫制备的抗体对 ＮＰＡＭＯＺ有良好的特异 ４ －１ 性．抗体效价为１∶３２×１０，对ＮＰＡＭＯＺ的半抑制质量浓度为４．５３ｎｇ·ｍＬ ；抗血清与ＣＰＡＭＯＺ、ＡＭＯＺ及呋喃它 酮的交叉反应率为７８．６％、１．５％及４．６％；与其他３种硝基呋喃类原药及其代谢物对硝基苯甲醛、对醛基苯甲酸等 结构相似物的交叉反应均小于０．０１％． 关键词：呋喃它酮代谢物；半抗原；多克隆抗体；酶联免疫测定法 中图分类号：Ｓ５１１；Ｓ５０２　　　　　　文献标志码：Ａ　　　　　文章编号：１００１４１１Ｘ（２０１４）０２００１８０６ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆａｒｔｉｆｉｃｉａｌａｎｔｉｇｅｎｓａｎｄｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｆｏｒｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉｓｅｒａａｇａｉｎｓｔ ３ａｍｉｎｏ２ｏｘａｚｏｌｉｄｉｎｏｎｅ，ａｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｏｆｆｕｒａｌｔａｄｏｎｅ ＳＨＵＪｉａｎｈｕａ，ＧＵＯＨｏｎｇｙａｎ，ＷＡＮＧＬｉｑｉ，ＧＡＯＹａｎ，ＺＥＮＧＺｈｅｎｌｉｎｇ （ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６４２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｈｉｇｈｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆｆｕｒａｌｔａｄｏｎｅ．【Ｍｅｔｈｏｄ】Ｆｕｒａｌｔａｄｏｎｅｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ（３ａｍｉｎｏ５ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｍｅｔｈｙｌ２ｏｘａｚｏｌｉｄｉｎｏｎｅ，ＡＭＯＺ） ｗａｓｃｏｕｐｌｅｄｔｏｃａｒｒｉｅｒｐｒｏｔｅｉｎｓ（ｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎｏｒｏｖａｌｂｕｍｉｎ）ａｎｄｒｅｄｕｃｅｄｗｉｔｈＮａＢＨｆｏｒｔｈｅｐｒｏ ４ ｄｕｃｔｉｏｎｏｆｉｍｍｕｎｏｇｅｎＡＭＯＺＢＳＡａｎｄｃｏａｔｉｎｇａｎｔｉｇｅｎＡＭＯＺＯＶＡｔｈｒｏｕｇｈ