MTT法检测细胞活力医学课件.pptVIP

MTT法检测细胞活力 * MTT法目的和意义 检测细胞存活和生长情况 用于评价药物产生的细胞毒作用 * 原理 四唑盐（噻唑蓝）是一种能接受氢原子的染料，简称MTT 活细胞的线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的紫蓝色结晶物，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量，从而反映细胞的增殖情况。 在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与活细胞数成正比。 * 活细胞+MTT 琥珀酸脱 氢酶 紫蓝色结晶物 Formazan * 贴壁细胞操作步骤 1.??接种细胞：用0.25%胰蛋白酶消化单层培养细胞，用含血清的培养液配成单个细胞悬液，以每孔2000-3000个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积90 ul。 （边缘孔用PBS或空白培养基填充）。 2.??培养细胞：将培养板移入CO2孵箱中，在37℃、5% CO2及饱和湿度条件下培养，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板，大约12h），加入浓度梯度的药物。原则上，细胞贴壁后即可加药，每孔加药10 ul，一般设5个复孔。 3. 5%CO2，37℃孵育分别孵育24小时后，倒置显微镜下观察。 * 4. 每孔加入10ul MTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。若药物与M