抗性作用机制.PDFVIP

微生物学通报 Dec. 20, 2018, 45(12): 2563−2575 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.180022 研究报告 天冬氨酸提高乳酸乳球菌Lactococcus lactis NZ9000 酸胁迫 抗性的作用机制 张彦位1,2 张娟1,2* 堵国成2,3 陈坚2,4 (1. 江南大学工业生物技术教育部重点实验室 江苏 无锡 214122) (2. 江南大学生物工程学院 江苏 无锡 214122) (3. 江南大学糖化学与生物技术教育部重点实验室 江苏 无锡 214122) (4. 江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室 江苏 无锡 214122) 摘 要：【背景】乳酸菌作为重要的发酵微生物在应用过程中面临广泛存在的酸胁迫。【目的】 确认天冬氨酸可有效提高乳酸乳球菌的酸胁迫抗性，通过解析天冬氨酸的作用机制，为进一步 提高乳酸菌酸胁迫抗性提供可借鉴的思路。【方法】通过荧光定量PCR 比较胁迫条件下天冬氨 酸对L . lactis NZ9000 产能和氨基酸代谢途径中关键基因转录水平的影响，并通过过量表达天 冬酰胺酶增加胞内天冬氨酸的含量。【结果】天冬氨酸主要是在转氨酶的作用下生成草酰乙酸 和谷氨酸。草酰乙酸参与三羧酸循环，为细胞提供更多的能量；谷氨酸经谷氨酸脱羧酶途径提 高细胞的酸胁迫抗性。经pH 4.0 胁迫处理后，天冬氨酸使糖酵解和三羧酸循环产能途径中关 键基因转录上调，胞内 ATP 含量为对照组的 42 倍；胞内谷氨酸含量为对照的 1.99 倍。通过 过量表达天冬酰胺酶获得的重组菌株，在 pH 3.6 条件下胁迫 0.5 h 后，存活率约为对照组的 11.11 倍。【结论】在L . lactis NZ9000 中探究了天冬氨酸提高酸胁迫抗性的作用机理，进一步完 善了氨基酸代谢提高乳酸菌酸胁迫抗性的理论基础。 关键词：Lactococcus lactis NZ9000 ，天冬氨酸，酸胁迫，荧光定量PCR ，天冬酰胺酶 Foundation items: National Natural Science Foundation of China ; Production Prospective Joint Research Project in Jiangsu Province (BY2016022-39) *Corresponding author: Tel: 86-510 E-mail: zhangj@ Received: January 08, 2018; Accepted: March 26, 2018; Published online () : May 15, 2018 基金项目：国家自然科学基金 ；江苏省产学研前瞻性联合研究项目(BY2016022-39) *通信作者：Tel ：86-510；E-mail ：zhangj@ 收稿日期：2018-01-08 ；接受日期：2018-03-26 ；网络首发日期() ：2018-05-15 2564 微生物学通报 Microbiol. China Improvement of acid-tolerance of Lact