高效液相色谱详解-郝建涛医学课件.pptVIP

为什么要过滤？ 1、对色谱柱、仪器起到保护作用 色谱柱：由于填料颗粒很细，色谱柱内腔很小，溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。 仪器：溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。 2、消除由于污染对分析结果的影响 * 3) 溶剂准备：脱气 * 目 的 流动相使用前必须进行脱气处理 ，以除去其中溶解气体。 以防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时，因压力降低而产生气泡。气泡会增加基线的噪音，造成灵敏度下降，甚至无法分析。 溶解的氧气还会导致样品中某些组份被氧化，柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能。 若用FLD，可能会造成荧光猝灭。 * 常用的脱气方法 氦气脱气法：利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹氦脱气，效果较好，但成本高。 加热回流法：效果较好，但操作复杂，且有毒性挥发污染。 抽真空脱气法：易抽走有机相。 超声脱气法：流动相放在超声波容器中，用超声波振荡10-15min，此法效果最差。 在线真空脱气法：Agilent1100LC真空脱机利用膜渗透技术， 在线脱气，智能控制，无需额外操作，成本低，脱气效果明显优于以上几种方法，并适用于多元溶剂体系。 * 3、流动相流速的选择 具体根据色谱柱的内径选择 柱子的内径（5μm填料） 流速（ml/min） 4.6 1 - 2 3.0 0.4 - 0.8 2.1 0.2 - 0.4 1.0 0.05 - 0.09 * 4、波长选择 首先在可见紫外分光光度计上测量样品液的吸收光谱，以选择合适的测量波长，如最灵敏的测量波长并避开其它物质的干扰。从紫外光谱中还可大体知道在HPLC中的响应值，如吸收度小于0.5时，HPLC测定的面积将会很小。 * 5．记录时间 第一次测定时，应先将空白溶剂、对照品溶液及供试品溶液各进一针，并尽量收集较长时间的图谱（如30分钟以上），以便确定样品中被分析组分峰的位置、分离度及是否还有杂质峰在较长时间内才洗脱出来，确定是否会影响主峰的测定。 * 三、Agilent 1100 机器操作 * 1、检查流动相 Purge阀（清洗阀、排液阀）处于松开状态 * Purge阀 逆时针打开清洗阀 顺时针关闭清洗阀 毛细管出口,流向进样器 废液管,清洗阀打开时溶剂由此流向废液瓶. * 1、检查流动相 Purge阀（清洗阀、排液阀）处于松开状态 把流动相放入溶剂瓶中，且滤头浸入到液面下 A 水 B 甲醇 C 乙腈 D 缓冲液 * 2、冲洗管路 选择流动相为10％异丙醇＋90％水 （按此比例配好溶液后存放在矿泉水瓶中） 调节流速大约为1d/3s。 * 3、打开电脑，等待TAP窗口出现 * 4、打开1100各模块开关 * 指示灯状态 每个部件接通电源后 LED灯显示绿色 关机 power off 准备进样 power on 没准备好Not Ready 运行Run 故障Error 驻留Resident Blink 仪器LED 状态显示 电源开关显示 黑Black 黑Black 黄Yellow 绿Green 红Red 黄闪烁Yellow blinking 6种LED仪器状态： * 5、待1100自检完毕，双击online，启动工作站化学工作站自动与1100LC通讯，进入工作站画面。 * * 其它功能菜单 文件处理 运行控制 仪器控制 序列 放弃任务 在线帮助 工作站任务切换快捷键 方法存取快捷键 序列存取快捷键 运行方法 运行序列 * 面对工作站，我该怎么办？What should I do？ 我们知道要运行样品需要设置控制仪器的参数，比如泵流速、流动相比例、柱温、检测器波长、样品校正等； 在Agilent化学工作站中我们把仪器控制和数据分析以及仪器相关的运行等所有参数称为一个方法——Method； 所以要运行一个样品，首先要得到一个正确的方法； 在Agilent化学工作站中要得到方法要么调用一个已经存在的方法，要么自己编辑一个新的方法； 一般来说，通过查阅资料比如国家标准或行业标准、药典、专业技术资料、EPA等都可以得到样品分析的详细方法； 您需要做的就是把这些方法在Agilent化学工作站中建立起来，然后运行仪器并得到数据。 * 6、方法的编辑 * 1）调用方法 在Method中点击Load Method…工作站弹出下面对话框. 在右面对话框中选中要调用的方法名,点击“OK”,该方法即被激活. * 使用 Edit Entire Method 编辑一个完整的方法 2）编辑一个新方法 * 选择所要编辑的内容 画面1:方法组成 在你想要的部分前选中,否则方法里将不包括该部分的内容。比如本方法不包括数据分析的内容。 方法信息 仪器