基于靶向肽的强化融合蛋白和化学偶联物的制备与抗肿瘤作用研究-微生物与生化药学专业论文.docxVIP

中国协和医科大学博士学位论文 中国协和医科大学博士学位论文 缩略语 缩略语 A490 absorbanoB at 490rim 490hm波长的吸光度 AE active enextiyne 活性型烯二炔发色团 Amp ampicillin 氨苄青霉素 BCA bicinchoninjc acid 二羧基二喹啉 BSA bovine SelBm albumin 牛血清白蛋白 DMS0 din】ethyl sulfoxide 二甲基亚砜 EDTA ethylenediamine tetra acetate 乙二胺四乙酸 EEDQ 2-Ethoxy-1-ethoxycarbonyl 2一乙氧基-1-乙氧碳酰基 -1,2-6ihydroquinolia 一1。2-二氢喹啉 EUSA enzyme linked／mmunosorbent assay 酶联免疫吸附分析 ESI．MS electrospray ionization 电喷雾电离质谱 mass spectrometry HPLC high-performance liquid 高压液相色谱 chromatography HRP horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 v． intravenous injection 静脉注射 ICso concentrati011 of50％inhibition 半数抑制浓度 IPrG isopropyl-p-thiogalactopyranoside 异丙基．争D，硫代半乳糖苷 Kan kanamycin 卡那霉素 LB Luria-Bertani(medium) LB培养基 LDM lidamycin 力达霉素 LDP lidaprotein 力达霉素辅基蛋白 MW molecular weight 分子量 NGR Asn-Gly-AIg 天冬酰胺．甘氨酸一精氨酸 NGR．LDP NGR-lidaprotein fusion protein NGR肽与LDP融合蛋白 中国协和医科大学博士学位论文 中国协和医科大学博士学位论文 缩略语 NGR．LDP．AE NGR-lidaprotein—active 强化的NGR肽与LDP融 enediyne 合蛋白 OD600 optical density al 600hm 600纳米的光密度 0PD o-phenylenediamine 邻苯二胺 PAGE polyacrylamide gel electrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 PBS phosphate—buffered saline 磷酸盐缓冲液 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 PVDF polyvinylidene fluoride 聚偏二氟乙烯 r．p．IlL revolutions per minute 每分钟转数 RGD Arg—Gly-Asp 精氨酸．甘氨酸．天冬氨酸 n上IP recombinant lidamyein apoprotein 带有信号肽的重组力达霉 素辅基蛋白 Rr Room temperature 室温 SDS sodium dodecyl sulfate 十二烷基磺酸钠 sngrldp gene ofNGR-LDP fusion protein NGR—LDP基因 TCA trichloroacetic acid 三氯醋酸 TLC thin layer chromatography 薄层层析 Xgal 5-bromo-4-chloro·-3--indolybbeta- 5一溴—4．氯一3一吲哚一13-o一半 D—galactopyranoside 乳糖苷 YNM yunnanmycin 云南霉素 中同饥和医科人学博上学位论文 中同饥和医科人学博上学位论文 中立摘要 中文摘要 小型化、高效化是靶向抗肿瘤药物的发展趋势，与抗体及其片段相比，靶向 肽具有分子量更小、免疫原性更弱的优点。本论文第一部分通过基因工程的方法 制备CDl3靶向肽NGR(Asn-GIy-Arg)与力达霉素辅基蛋白的融合蛋白，再通过 分子强化技术组装发色团，得到有活性的强化融合蛋白，并对其体内外抗肿瘤活 性进行研究。第二部分通过化学方法合成抗黏附肽RGD(Arg-Gly-Asp)与云南霉 素(yunnanyein,YNM)的偶联物，并研究其抗肿瘤活性。 1。CDl3靶向肽与力达霉素强化融合蛋白的制备及抗肿瘤活性 NGR-CDl3是良好的肿瘤新生血管靶向系统，NGR序列与肿瘤血管内皮细 胞表达的CDl3异构体特异结合。力达霉素(1idamycin．LDM,又叫C1027)是 大分子肽类抗肿瘤抗生素，由辅基蛋I；1(1idaprotein,LDP)和活性烯二炔发色