油页岩微生物总DNA的提取方法-东北大学.PDF

第３５卷第４期 东 北 大 学 学 报 （ 自 然 科 学 版 ） Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．４ ２０１４年 ４月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｏｒｔｈｅａｓｔｅｒｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ） Ａｐｒ．　２０１４ 　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００５－３０２６．２０１４．０４．０３０ 油页岩微生物总 ＤＮＡ的提取方法 １ １，２ １ ２ 蒋绍妍 ，王文星 ，薛向欣 ，侯晓娇 （１东北大学 材料与冶金学院，辽宁 沈阳　１１０８１９；２东北大学 生命科学与健康学院，辽宁 沈阳　１１０８１９） 摘　　　要：为建立油页岩微生物总ＤＮＡ提取方法，以两矿区的６个样品为材料，采用ＳＤＳ高盐、ＳＤＳ液氮 研磨、ＳＤＳ反复冻融、ＳＤＳ异硫氰酸胍和试剂盒提取法分别对总ＤＮＡ进行提取．结果表明，各方法提取效果 差异很大，改进的ＳＤＳ高盐提取法效果最好，各样品均得到约２３ｋｂ较完整片段，且产率显著高于其他方法， －１ 达９１４４～３８６８５ｎｇ·ｇ 干样；以未纯化的ＤＮＡ为模板，对１６ＳｒＤＮＡ进行ＰＣＲ－ＤＧＧＥ，得到了相应的扩增 产物及ＤＧＧＥ指纹图谱，说明该法适合油页岩样品．ＳＤＳ液氮研磨和ＳＤＳ反复冻融提取法仅能得到部分样品 总ＤＮＡ，且产率和纯度较低，而ＳＤＳ异硫氰酸胍和试剂盒提取法无ＤＮＡ提出，不适合此类样品． 关　键　词：油页岩；微生物总ＤＮＡ；提取方法；ＰＣＲ－ＤＧＧＥ；ＳＤＳ高盐提取法 中图分类号：ＴＰ２７４　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００５－３０２６（２０１４）０４－０５８８－０５ ＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄｓｏｆＭｉｃｒｏｂｉａｌＴｏｔａｌＤＮＡｆｒｏｍＯｉｌＳｈａｌｅｓ １ １，２ １ ２ ＪＩＡＮＧＳｈａｏｙａｎ，ＷＡＮＧＷｅｎｘｉｎｇ ，ＸＵＥＸｉａｎｇｘｉｎ，ＨＯＵＸｉａｏｊｉａｏ （１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＭａｔｅｒｉａｌｓ＆Ｍｅｔａｌｌｕｒｇｙ，ＮｏｒｔｈｅａｓｔｅｒｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１０８１９，Ｃｈｉｎａ；２．ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅ＆ ＨｅａｌｔｈＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＮｏｒｔｈｅａｓｔｅｒｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１０８１９，Ｃｈｉｎａ．Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＸＵＥＸｉａｎｇｘｉｎ， Ｅｍａｉｌ：ｘｕｅｘｘ＠ｍａｉｌ．ｎｅｕ．ｅｄｕ．ｃｎ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｄｅｖｅｌｏｐａｎａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｍｉｃｒｏｂｉａｌｔｏｔａｌＤＮＡｆｒｏｍｏｉｌ ｓｈａｌｅｓ，５ｍｅｔｈｏｄｓ（ＳＤＳｈｉｇｈｓａｌｔｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ＳＤＳｇｒｉｎｄｉｎｇｉｎｌｉｑｕｉｄｎｉｔｒｏｇｅｎｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ＳＤＳ ｒｅｐｅａｔｅｄｆｒｅｅｚｅｔｈａｗｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ＳＤＳｇｕａｎｉｄｉｎｉｕｍｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｋｉｔｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ） ｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄｔｏｅｘｔｒａｃｔｔｏｔａｌＤＮＡｏｆ６ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍｔｗｏｍｉｎｅｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｔｏｔａｌＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｓｏｆｆｉｖｅｍｅｔｈｏｄｓｖａｒｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ．Ｔｈｅｉｍｐｒｏｖｅｄ ＳＤＳｈｉｇｈｓａｌｔｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｉｓｔｈｅｂｅｓｔ，ｗｈｉｃｈｃａｎｏｂｔａｉｎｔｏｔａｌＤＮＡｗｉｔｈａｂｏｕｔ２３ｋｂｌｅｎｇｔｈ －１ ａｎｄ９１４４～３８６８５ｎｇ·ｇ ｄｒｙｓａｍｐｌｅ．Ｔｈｅｙｉｅｌｄｒａｔｅｉｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｏｔｈｅｒｍｅｔｈｏｄｓ． Ｔｈｅｎ，ｔｈｅｔｏｔａｌＤＮＡｓｗｉｔｈｏ