海蜇Frizzled1基因的克隆及在无性繁殖中的表达-中国水产科学.PDF

中国水产科学 2018 年 11 月, 25(6): 13351346 Journal of Fishery Sciences of China 研究论文 DOI: 10.3724/SP.J.1118.2018.17407 海蜇Frizzled1 基因的克隆及在无性繁殖中的表达 1, 2 2, 3 2, 4 2 2, 3 潘滢 , 朱玲 , 周春娅 , 陈四清, 庄志猛 1. 厦门大学海洋与地球学院, 福建 厦门 361005; 2. 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室, 中国水产科学研究院黄海水产研究所, 山东 青岛 266071; 3. 青岛海洋科学与技术国家实验室, 山东 青岛 266237; 4. 上海海洋大学水产与生命学院, 上海 201306 摘要: 采用RACE 技术解析了海蜇(Rhopilema esculentum) Frizzled1 基因的cDNA 和基因组结构: Re -Fzd1 基因的全 长cDNA 为2387 bp, 其中编码区为 1761 bp, 编码586 个氨基酸的多肽。SMART 分析表明, Re -Fzd1 基因具备Fzd 家族共同的结构特征, 包括: 一个由 23 个氨基酸组成的信号肽, 一个位于 N-末端富含 10 个保守半胱氨酸残基的 半胱氨酸富集域(CRD), 一个含有7 个跨膜片段的跨膜结构域, 以及一个含有5 个重要的磷酸化位点的C 端尾巴。 多序列比对表明, Re-Fzd1 基因与刺胞动物贝螅(Hydra echinata) 、水螅(Hydra vulgaris) 、半球美螅水母(Clytia hemisphaerica)和海葵(Nematostella vectensis) Fzd1 具有高度相似性, 与来自脊椎动物人(Homo sapiens) 、鼠(Mus musculus) 、爪蟾(Xenopus laevis )和斑马鱼(Danio rerio) 的Fzd1 、Fzd2 和Fzd7 家族基因也具有较高的同源性。基于 N-J 法, 将人、鼠、爪蟾、斑马鱼和果蝇(Drosophila melanogaster)所有Fzd 家族基因系统进化分析显示, 除果蝇外, 所有Fzd 家族成员聚类成4 个类群, 11 个亚家族, 海蜇Re -Fzd1 基因首先与刺胞动物门的Fzd1 聚类在一起, 然后 与脊椎动物Fzd1 、Fzd2 和Fzd7 三个家族聚成一个类群, 表明脊椎动物 Fzd1 、Fzd2 和Fzd7 家族可能与刺胞动物 门的Fzd1 起源于同一个共同祖先。Re -Fzd1 基因组序列中不含有内含子。实时荧光定量 PCR 结果显示, Re -Fzd1 基因在海蜇无性繁殖的 4 个发育阶段均有表达, 其中, 表达量最高的横裂体阶段是表达量最低的稚水母阶段的 3.67 倍。整体原位杂交显示, 在海蜇横裂体时期, Re -Fzd1 原位表达在触手、基座及发生横裂的部位。这些结果都 表明, Re -Fzd1 不但参与了海蜇的早期发育过程, 还调控了海蜇无性繁殖的发生。 关键词: 海蜇; Frizzled; cDNA; 基因组结构; 整体原位杂交; 无性繁殖 中图分类号: S917 文献标志码: A 文章编号: 10058737(2018)06133512 Wnt 信号通路是一类进化保守的信号途径, 次被发现在研究果蝇(Drosophila melanogaster)上 调控生物发育的多个环节, 掌控细胞增殖、分化、 皮细胞极性的阻断突变筛选试验过程中[5] 。随后, 凋亡和极性等细胞命运[1] 。目前公认的Wnt 信号 在多种后口动物中也都发现了 Fzd 家族成员, 其 途径主要有 3 条, 经典的Wnt/β-catenin 途径、平 中在脊