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第八章.基因工程及其在医药学中的应用 重组DNA技术 DNA Recombination Technique ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ DNA 1865 G.J.Mendel 1944 O.T.Avery 1973DNA 1977 DNA 1980DNA 1997 一、重组DNA技术相关概念 一、重组DNA技术相关概念 （一）DNA克隆 1. 克隆(clone) 来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。 2.克隆化(cloning) 获取同一拷贝的过程称为克隆化(cloning) 即无性繁殖。 技术水平: (1)分子克隆(molecular clone),即DNA 克隆 ; (2)细胞克隆； (3)个体克隆（动物或植物）。 细胞的分化潜能 细胞的分化潜能 全能性(totipotency) 全能性(totipotency) 一个细胞在一定条件下具有发 一个细胞在一定条件下具有发 育成完整个体的潜能，称为细胞 育成完整个体的潜能，称为细胞 的全能性(totipotency) 。具有这种 的全能性(totipotency) 。具有这种 潜能的细胞称为全能性细胞。 潜能的细胞称为全能性细胞。 细胞核全能性 细胞核全能性 3. DNA克隆 应用酶学的方法，在体外将各种来源的 遗传物质与载体DNA接合成一具有自我复制 能力的DNA分子—— 复制子(replicon)继而 通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的 基因的转化子细胞，再进行扩增，提取获得 大量同一DNA分子，也称基因克隆或重组 DNA (recombinant DNA) DNA克隆目的: ① 分离获得某一感兴趣的基因或 DNA; ② 获得感兴趣基因的表达产物（蛋 白质） DNA DNA cDNA PCR DNA 目录 （二）工具酶  限制性核酸内切酶 DNA DNA     Taq DNA 1.限制性核酸内切酶 (restriction endonuclease, RE) (1) 定义 识别DNA的特异序列, 并在识别位点 或其周围切割双链DNA的一类内切酶。 Bam H Ⅰ GGATCC G + GATCC + CCTAGG CCTAG G (2) 分类、作用 (2) 分类、作用  基因工程技术中常用Ⅱ型 与甲基化酶共同构成细菌的限制 修饰系统：限制外源DNA，保护自 身DNA，稳定细菌遗传性状。 (3)命名 (3)命名