试剂盒试用报告-川布兰生物.DOC

中学生物实验整体解决方案第一品牌 400-696-5155 试剂盒试用报告 基本情况 单位名称 株洲市南方中学 申请试剂盒名称 人性别的鉴定 申请渠道 1.洛阳会议 2.朋友推荐 3.教研组织 4 网络 试用背景： 写写您的试用背景，让我们了解您的实验条件，以便日后更好的为您服务。 1、有无生物新课标实验室？ 2、有无相关仪器配备？ 3、是否开展过相关实验？ 我们学校在2011年对实验室进行了改造，建成了新的实验室，高规格的配备了许多新的实验仪器，可以开展了许多学生自主探究实验。在川布兰的帮助下，我们开展了PCR的学生实验，现在我们想知道PCR仪的更多用途，所以申请了此实验试剂盒。 试用过程与结果 实验名称：人性别的鉴定 实验仪器及实验材料： PCR仪，微量移液器，带有毛囊的头发，人性别鉴定的试剂盒（包括Taq聚合酶，缓冲液，Mgcl2,dNTPS，引物I，引物II），电泳仪，琼脂糖凝胶 实验步骤（含操作过程照片）： 1、配制预混液 首先打开试剂盒，取出PCR预混液的各种成分，放入离心机里离心数秒中。之后根据你所要求组数，计算所需各种组分的数量，配制成PCR预混液，再在0.5mL离心管中加入下列成分： PCR预混合液 19μL 模版DNA 1μL 总体积 20μL （见图一、图二） 图二 配制预混液及分装 图二 配制预混液及分装 图一：各种组成成分离心 2、每组拔取3根带有毛囊的头发（两男两女），剪下毛囊，分别放入0.5ml的离心管中，做好标记，取20μ已配好的预混液加入到离心管中，然后加入15μL液体石蜡 3、将离心管放人全自动基因扩增仪中，按照下列反应程序设定参数，进行扩增实验。（ 见图三） 循环过程 温度 时间 循环次数 预变性 95℃ 30s 变性 95℃ 20s 30次 退火 52℃ 20s 延伸 72℃ 20s 保温 72℃ 30s 图三 图三 PCR扩增 4、制作琼脂糖凝胶块 （1） 配胶 将50×电泳缓冲液稀释至1×电泳液冲液。取0.25g琼脂糖加到装有25mL 1×电泳缓冲液的150mL三角瓶中，瓶口用封口膜封住，在沸水浴或微波炉内加热至琼脂糖完全熔化。 （2）倒胶：把U型凝胶托盘放入制胶槽中，插好梳子，把配好的琼脂糖凝胶，倒入凝胶板，待凝固后，拔出梳子，把凝胶点样孔一端靠负极方向，放入电泳槽中。（见图四、图五） 图五图四 图五 图四 5、点样：吸取PCR反应产物20μL转移到一个新离心管中，加入1μL 6×Loading Buffer 和1μL核酸荧光染料充分混合，取10μL加入点样孔内。 6、点样后盖好盖子，连接正负极，在80V恒压条件下电泳。电泳20分钟 （见图六） 图六 图六 电泳 注意事项： 加样不宜过多，以免跑不开电泳，一般20μL DNA中加入2μL染料和6×Loading Buffer混合物混匀，取10μL加入点样孔；恒压电泳时把电流调到最大，恒压80V电压。 7、放在图谱观察仪观察 （见图七、图八） 图七 图谱观察仪 图七 图谱观察仪 图八 图谱观察 实验结果（实验结果照片 见图九）： 有亮的条带是男的，没有条带的是女的 图九 图九 人性别鉴定结果 实验结果分析： 电泳之后，男的条带亮度有一根亮，另外一根不是很亮，可能跟取材有关，也可能点样的时候操作有误差。以后要多做几组，效果可能更明显。 使用试剂盒心得（使用试剂盒与传统配制试剂方法组织开展同一实验有何优势和不足） 方便，减轻了老师的工作量，也有利于节约实验材料，实验效果也很好。 试剂盒或仪器使用改进意见 试剂盒形式很好，就是在运输途中，经过颠簸，有的时候试剂有损耗。