剪接因子SRSF1在肺癌中的作用及其对肺癌细胞生物学行为影响的基础研究-肿瘤学专业论文.docx

目 目 录 一、摘要 ．．1 (一)中文摘要 1 (二)英文摘要 6 二、正文 13 第一部分检测SRSFl基因在不同肺癌组织类型和细胞中的表达及 其对预后相关性的初步探讨 (一)前言 ．．13 (二)材料和方法 ．15 1．材料 ．15 1．1 细胞系 ．15 1．2肺癌组织标本 ．15 1．3组织芯片 16 1．4主要仪器和试剂 17 1．5主要溶液的配置 20 2．实验方法 ．．20 2．1 SRSFl相关基因的筛选方法 ．．20 2．2 SRSFl相关基因的功能分类方法 20 23细胞培养、传代、复苏及冻存 ．．20 2．4免疫印迹法 21 2．5逆转录．聚合酶链反应 ．．22 2．6实时定量．聚合酶链反应 24 2．7组织芯片技术 25 万方数据 2．8统计学分析 2．8统计学分析 ．26 ()结果 ．27 1．SRSFl相关基因的分析结果 ．27 1．1 SRSFl相关基因的筛选结果 27 1．2 SRSFl相关基因的蛋白功能分析 27 2．检测SRSFl基因在不同肺癌组织类型和细胞中的表达 28 2．1 SRSFl基因在肺癌细胞系中的表达 ．．28 2．2 SRSFl蛋自在肺癌组织中的表达 29 2．3 SRSFl蛋白在肺癌组织芯片中的表达 ．．30 3．SRSFl与肺癌临床病理特征及预后的相关性分析 ．31 3．1 SRSFl与肺癌临床病理特征的相关性 ．．31 3．2 SRSFl与肺癌患者预后的相关性 ．．33 (四)讨论 ．．34 (五)结论 ．．36 (六)参考文献 ．．37 第二部分探讨SRSFl基因对肺癌细胞生物学行为的影响及相关 机制研究 N—^2一—L (一J日U舌 ． ． ．40 (二)材料和方法 。41 1．材料 ．41 1．1细胞系 41 1．2裸鼠 ．．41 1．3主要仪器和试剂 41 万方数据 1．4主要溶液的配置 1．4主要溶液的配置 ．44 2．实验方法 44 2．1细胞培养、传代、复苏及冻存 44 2．2免疫印迹法 ．．44 2．3逆转录一聚合酶链反应 ．．44 2．4实时定量．聚合酶链反应 ．．44 2．5构建质粒 44 2．6细胞转染 45 2．7平板克隆形成实验 46 2．8细胞划痕愈合实验 47 2．9 Transwell体外迁移和侵袭实验 ．47 2．10细胞凋亡检测实验 ． ．48 2．11细胞周期检测实验 ．．48 2．12裸鼠成瘤实验 ．49 2．13统计学分析 ．．49 (三)结果 ．50 1．过表达SRSFl基因对肺癌细胞生物学行为的影响 50 1．1建立稳定表达SRSFl基因的肺癌细胞株 ．．50 1．2过表达SRSFl基因促进肺癌细胞的增殖和运动能力 50 1．3过表达SRSFl基因促进肺癌细胞的迁移和侵袭能力 51 1．4过表达SRSFl基因减少肺癌细胞凋亡 ．．53 1．5过表达SRSFl基因改变肺癌细胞周期 ．．53 1．6过表达SRSFl基因促进裸鼠肿瘤形成 ．．54 万方数据 2．沉默SRSFl基因对肺癌细胞生物学功能的影响 2．沉默SRSFl基因对肺癌细胞生物学功能的影响 ．．55 2．1建立稳定沉默SRSFI基因的肺癌细胞株 ．．56 2．2沉默SRSFl基因抑制肺癌细胞的增殖和运动能力 56 2．3沉默SRSFl基因抑制肺癌细胞的迁移和侵袭能力 57 3．SRSFl基因与肺癌EMT相关蛋白的关系 ．59 (四)讨论 ．60 (五)结论 ．64 (六)参考文献 ．65 第三部分研究肺痛细胞中SRSFl基因对抗肿痛治疗敏感性的影响 (一)前言(一)日U舌 ． ．71．71 (二)材料和方法 ．72 1．材料 72 1．1细胞系 72 1．2主要仪器和试剂 72 2．实验方法 73 2．1顺铂敏感性实验 73 2．2细胞增殖．毒性检测实验 ．． 74 2．3化疗方法 74 2．4热疗方法 74 2．5 x线照射方法 ．74 2．6热疗联合化疗方法 ．．75 2．7热疗联合放疗方法 ．．75 2．8细胞凋亡检测实验 75 万方数据 2．9统计学分析 2．9统计学分析 ．．75 (_)结果 76 1．过表达SRSFl基因对肺癌细胞抗肿瘤治疗敏感性的影响 76 1．1 过表达SRSFl基因降低肺癌细胞对DDP的敏感性 ．76 1．2过表达SRSFl基因对抗肿瘤治疗后的肺癌细胞增殖 的影响 ．77 1．3过表达SRSFl基因对抗肿瘤治疗后的肺癌细胞凋亡 的影响 ．78 2．沉默SRSFl基I闻对肺癌细胞抗肿瘤治疗敏感性的影响 79 2．1 沉默SRSFl基因增加肺癌细胞对DDP的敏感性 ．79 2．2沉默SRSFl基因对抗肿瘤治疗后的肺癌细胞增殖 的影响 ．．79 2．3沉默SRSFl基因对抗肿瘤治疗后的肺癌细胞凋亡 的影响 ．．80 (四)讨