啮齿柠檬酸杆菌SYBRGreenI-上海动物研究中心.PDFVIP

第39卷第5期 中国预防兽医学报 V01．39．No．5 2017年5月 ChineseJournalofPreventive Medicine May．2017 Veterinary doi：10．39698．issn．1008-0425．2017．05．13 GreenI 啮齿柠檬酸杆菌SYBR 荧光定量PCR检测方法的建立 冯 诚2+ 洁1，一，谢建云2，张泉1，魏晓锋2，胡建华2，高 (1．扬州大学兽医学院，江苏扬州225009； 2．上海实验动物研究中心上海市实验动物质量监督检验站，上海201203) 摘要：为建立快速检测啮齿柠檬酸杆菌(C．rodentium)espB基因的方法，本研究根据GenBank中登录的 C．rodentium SYBRGreenI荧光定量PCR检测方法。结 B基因序列设计1对特异性引物，建立了C．rodentium esp 果显示，在102拷贝／止～10s拷贝／斗L浓度范围内标准曲线循环阂值与模板浓度呈良好的线性关系。该方法仅对 C．rodenfimn进行特异性扩增，而对牛棒状杆菌、鼠伤寒沙门茵、嗜肺巴斯德杆菌、支气管鲍特杆菌、金黄色葡 萄球菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯杆菌扩增结果均为阴性，具有良好的特异性。其检测灵敏度可达24拷贝／斗L。 组内和组间试验变异系数均小于1％，重复性良好。临床样品初步应用结果显示，荧光定量PCR阳性检出率为 SYBRGreen I荧光定量PCR检测方法为实验动物C．rodentium的检测和流行病学调查提供了技术支撑。 Green 关键词：啮齿柠檬酸杆茵；SYBR I；荧光定量PCR 中图分类号：$852．61 文献标识码：A GreenI basedreal—timePCRmethodfor ofSYBR Development rodentium detectionofCitrobactef FENG Jiel，一，XIE Quanl，WEIXiao—feng，HUJian—hua2，GAOChen92+ Jian—yun2，ZHANG of University，Yangzhou225009，China： (1．CollegeVeterinaryMedicine，Yangzhou AnimalResearch Centerof Monitoring LaboratoryAnimals，Shanghai201203，China) 2．ShanghaiLaboratory Center，ShanghaiQuality Abstract：Toestablisha and methodforCitrobacterrodentiumrodentium SYBRGreenI based rapid specific detection，a