红松褐环乳牛肝菌根化苗木培育技术规程-黑龙江质量技术监督局.DOC

ICS?65.020.40 B 61 DB23 黑龙江省地方标准 红松褐环乳牛肝菌根化苗木培育技术规程 2018 - XX - XX发布 2018 -XX - XX实施 黑龙江省质量技术监督局???发布 DB23/T XXXX—2018 DB23/T XXXX—2018 PAGE \* MERGEFORMAT I 前?? 言 本标准依据GB/T 1.1-2009的编写规则起草。 本标准由黑龙江省林业厅提出并归口。 本标准起草单位：黑龙江大学、鹤岗市林木良种繁育基地。 本标准主要起草人：宋福强、唐杰、李海涛、庞丽杰、李冲伟、范晓旭、曹振宇、焦宝东、曹胜利、温育鹏、齐贵臣、赵明。 红松褐环乳牛肝菌根化苗木培育技术规程 范围 本标准规定了红松（Pinus koraiensis）褐环乳牛肝（Suillus luteus）菌根化苗木培育的菌剂制备、菌根化苗木培育、幼苗管理、苗木出圃和生产档案。 本标准适用于红松褐环乳牛肝菌根化苗木培育。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 2772 林木种子检验规程 GB/T 8321 农药合理使用准则 NY/T 883-2004 农用微生物菌剂生产技术规程 DB23/T 389-2001 林木育苗技术规程 DB21/T 1569-2007 红松果材兼用林育苗技术规程 菌剂制备 培养基选择 3.1.1 MMN培养基配方 氯化钙0.05 g、磷酸二氢钾0.05 g、氯化钠0.05 g、磷酸氢二铵0.25 g、七水合硫酸镁0.15 g、三氯化铁（1%）1 ml~2 ml、维生素B110 mg、葡萄糖10 g、蒸馏水1000 ml、琼脂15 g~20 g。 3.1.2 麦芽汁液体培养基配方 麦芽汁6 g、酵母粉6 g、磷酸二氢钾0.25 g、七水合硫酸镁0.3 g、氯化钙0.2 g、三氯化铁48 mg、柠檬酸0.1 g、维生素B1 2 mg、蒸馏水1000 ml、pH 5.5~6.5。 培养基制备 3.2.1 MMN培养基 烧杯中加入600 ml蒸馏水，按上述配方的顺序分别加入试剂，加热，所有试剂完全溶解后用蒸馏水定容至1000 ml。将培养基分装到试管中，培养基约占试管总体积的1/5，封盖，标记培养基的名称及日期，0.1 MPa、121 ℃高压蒸汽灭菌20 min。将灭菌的培养基冷却至50 ℃时将斜面培养基的试管口放置于一定高度的器具上，斜面长度以不超过斜面的1/2为宜。其余培养基无菌操作倒入培养皿中制作为平板（每个培养皿约25 ml培养基），等培养基凝固后将平板倒置，待用。 3.2.2 麦芽汁液体培养基 烧杯中加入600 ml蒸馏水，按上述配方的顺序分别加入试剂，试剂完全溶解后用蒸馏水定容至1000 ml。调pH 5.5~6.5。之后将培养基分装到三角瓶中（不超过三角瓶体积的1/2），高压灭菌待用。 一级菌种制备 将采集到的褐环乳牛肝子实体进行消毒，切取小部分组织块接种至MMN固体平板培养基中培养72 h~96 h，之后再将平板中新生长的菌丝接种到新的固体培养基中，如此重复3次~5次，直至培养基中菌落形态单一，大小相似，颜色相同则认为是单一菌种。之后将最新培养的菌丝接种至斜面培养基中于28 ℃环境培养至菌丝长满培养基的2/3则认为一级菌种制备成功。于4 ℃环境下保存，保质期不超过6个月。 二级菌种制备 将一级菌种再进行无菌操作接入到灭菌后的麦芽汁液体培养基中，于28 ℃、180 rpm培养96 h~100 h。 三级菌种（菌剂）制备 将二级菌种按照1:100的比例接种到大型发酵罐中制备菌根菌剂，备用。生产环境及生产流程按照NY/T883-2004规定执行。 菌根化苗木培育 红松种子采收及处理 4.1.1 种子采收与检验 选择生长旺盛期、无病虫害、品种优良的红松果树作为母株采种。在种子调制过程中应筛去小粒种子。种子质量检验按照GB 2772的规定执行。 4.1.2 种子处理 种子消毒、贮藏及催芽处理按照DB21/T 1569-2007有关规定执行。 育苗地准备 4.2.1播种地的选择 土壤肥沃，质地疏松、排水良好，pH值为5.5~6.5的壤土或沙壤土。 4.2.2 整地与土壤处理 红松育苗整地宜在秋季进行。平整土地，深翻细耙，翻地深度为30 cm。土壤消毒使用农药应符合GB/T 8321的有关规定。 4.2.3 作床 苗床应南北走向。采用高床育苗，床高20 cm~25 cm，床面宽110 c m，床长10 m，床间步道50 cm。土壤粉碎，床面应平整，镇压。 4.3 播种育苗 4.3.1 播种时间 宜春播，适时早播，土壤5cm深度处地温稳定在6 ℃~