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红松褐环乳牛肝菌根化苗木培育技术规程-黑龙江质量技术监督局
ICS?65.020.40
B 61
DB23
黑龙江省地方标准
红松褐环乳牛肝菌根化苗木培育技术规程
2018 - XX - XX发布
2018 -XX - XX实施
黑龙江省质量技术监督局???发布
DB23/T XXXX—2018
DB23/T XXXX—2018
PAGE \* MERGEFORMAT I
前?? 言
本标准依据GB/T 1.1-2009的编写规则起草。
本标准由黑龙江省林业厅提出并归口。
本标准起草单位:黑龙江大学、鹤岗市林木良种繁育基地。
本标准主要起草人:宋福强、唐杰、李海涛、庞丽杰、李冲伟、范晓旭、曹振宇、焦宝东、曹胜利、温育鹏、齐贵臣、赵明。
红松褐环乳牛肝菌根化苗木培育技术规程
范围
本标准规定了红松(Pinus koraiensis)褐环乳牛肝(Suillus luteus)菌根化苗木培育的菌剂制备、菌根化苗木培育、幼苗管理、苗木出圃和生产档案。
本标准适用于红松褐环乳牛肝菌根化苗木培育。
规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB 2772 林木种子检验规程
GB/T 8321 农药合理使用准则
NY/T 883-2004 农用微生物菌剂生产技术规程
DB23/T 389-2001 林木育苗技术规程
DB21/T 1569-2007 红松果材兼用林育苗技术规程
菌剂制备
培养基选择
3.1.1 MMN培养基配方
氯化钙0.05 g、磷酸二氢钾0.05 g、氯化钠0.05 g、磷酸氢二铵0.25 g、七水合硫酸镁0.15 g、三氯化铁(1%)1 ml~2 ml、维生素B110 mg、葡萄糖10 g、蒸馏水1000 ml、琼脂15 g~20 g。
3.1.2 麦芽汁液体培养基配方
麦芽汁6 g、酵母粉6 g、磷酸二氢钾0.25 g、七水合硫酸镁0.3 g、氯化钙0.2 g、三氯化铁48 mg、柠檬酸0.1 g、维生素B1 2 mg、蒸馏水1000 ml、pH 5.5~6.5。
培养基制备
3.2.1 MMN培养基
烧杯中加入600 ml蒸馏水,按上述配方的顺序分别加入试剂,加热,所有试剂完全溶解后用蒸馏水定容至1000 ml。将培养基分装到试管中,培养基约占试管总体积的1/5,封盖,标记培养基的名称及日期,0.1 MPa、121 ℃高压蒸汽灭菌20 min。将灭菌的培养基冷却至50 ℃时将斜面培养基的试管口放置于一定高度的器具上,斜面长度以不超过斜面的1/2为宜。其余培养基无菌操作倒入培养皿中制作为平板(每个培养皿约25 ml培养基),等培养基凝固后将平板倒置,待用。
3.2.2 麦芽汁液体培养基
烧杯中加入600 ml蒸馏水,按上述配方的顺序分别加入试剂,试剂完全溶解后用蒸馏水定容至1000 ml。调pH 5.5~6.5。之后将培养基分装到三角瓶中(不超过三角瓶体积的1/2),高压灭菌待用。
一级菌种制备
将采集到的褐环乳牛肝子实体进行消毒,切取小部分组织块接种至MMN固体平板培养基中培养72 h~96 h,之后再将平板中新生长的菌丝接种到新的固体培养基中,如此重复3次~5次,直至培养基中菌落形态单一,大小相似,颜色相同则认为是单一菌种。之后将最新培养的菌丝接种至斜面培养基中于28 ℃环境培养至菌丝长满培养基的2/3则认为一级菌种制备成功。于4 ℃环境下保存,保质期不超过6个月。
二级菌种制备
将一级菌种再进行无菌操作接入到灭菌后的麦芽汁液体培养基中,于28 ℃、180 rpm培养96 h~100 h。
三级菌种(菌剂)制备
将二级菌种按照1:100的比例接种到大型发酵罐中制备菌根菌剂,备用。生产环境及生产流程按照NY/T883-2004规定执行。
菌根化苗木培育
红松种子采收及处理
4.1.1 种子采收与检验
选择生长旺盛期、无病虫害、品种优良的红松果树作为母株采种。在种子调制过程中应筛去小粒种子。种子质量检验按照GB 2772的规定执行。
4.1.2 种子处理
种子消毒、贮藏及催芽处理按照DB21/T 1569-2007有关规定执行。
育苗地准备
4.2.1播种地的选择
土壤肥沃,质地疏松、排水良好,pH值为5.5~6.5的壤土或沙壤土。
4.2.2 整地与土壤处理
红松育苗整地宜在秋季进行。平整土地,深翻细耙,翻地深度为30 cm。土壤消毒使用农药应符合GB/T 8321的有关规定。
4.2.3 作床
苗床应南北走向。采用高床育苗,床高20 cm~25 cm,床面宽110 c m,床长10 m,床间步道50 cm。土壤粉碎,床面应平整,镇压。
4.3 播种育苗
4.3.1 播种时间
宜春播,适时早播,土壤5cm深度处地温稳定在6 ℃~
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