细胞生物学-线粒体.pptVIP

膜内外质子浓度差和电势差构成质子动力势，驱动质子穿过ＡＴＰ酶，促使ＡＴＰ合成； 化学渗透假说的实验证据： 细菌视紫红质 质子泵 ·ATP合成动力为质子动力势 ·完整性膜是维持质子动力势的前提； ·电子传递和ATP合成是相关但又不同的事件。 ? 去垢剂 ATP酶 加入磷脂并去除去垢剂 脂质体 （三）ATP合成酶作用机制 以PD Boyer为代表，提出了通过ATP合酶合成ATP的“结合变化” (binding change mechanism) 和“旋转模型”(rotational model)。 内容：ATP合酶3个β亚基各具一定构象，不同构象与核苷酸亲和力不同。H+流驱动γ和ε旋转1200的情况下，3β亚基构象发生相互转变，引起β亚基对ATP、ADP和Pi亲和力的改变，使ATP合成和释放。 P．D．Boyer和J．E．Walker荣获1997年诺贝尔化学奖(各1/4，另1/2由Na+-K+泵学说提出者获得)。 a和c产生/失去瞬间盐桥 c的Asp 结合/解离H+ c极性环和转子结合/分离 产生扭力距使转子转动 H+ 通过a和c亚基形成的通道，推动转子旋转 质子动力势推动H+沿膜间腔?I?c-Asp?II 流动，驱动c和γ旋转；象水轮发电机一样工作。 Arg H+通II H+通道I 结合变化机制： β三种状态: O 空置状态 T 紧密结合态 L 松散结合态 γ和ε的转动引起β构象变化，催化ATP生成 ATP ADP＋Pi 在嗜热菌的F1ATPase β的N端添加10个His，固定在Ni-NTA膜上； 将γN端的一个Ser换为Cys，以连上肌动蛋白丝(荧光标记)； 加ATP后可观察到肌动蛋白丝旋转； Noji H et al. 1997, Nature 转子旋转的试验学证据： 四 半自主性的细胞器—线粒体 线粒体是一个含有DNA并能进行转录和转译的细胞器。 线粒体中含有DNA 、 mRNA、tRNA、核糖体、氨基酸活化酶等。 1966年Slonimski证明了线粒体DNA具有遗传功能，被认为是真核细胞的第二遗传系统。 1 线粒体DNA的结构 线粒体DNA (简称mtDNA) 较小，结构简单，位于线粒体基质中和线粒体内膜上。 不含组蛋白，呈环形，与细菌基因组相似。 哺乳动物线粒体基因组大小为16 500 碱基对(bp)。 2 线粒体基因组编码的RNA和蛋白质 线粒体DNA转录的rRNA、tRNA均通过线粒体核糖体用于合成线粒体蛋白质（数目有限）。 真核生物线粒体核糖体的RNA组分和蛋白质的构成、大小及对抗生素敏感性方面均不同于细胞质核糖体，但某些方面类似原核生物核糖体。 线粒体中的多数蛋白由核基因编码、在细胞质核糖体中合成。故线粒体基因在转录与转译过程中受核基因控制，对核基因具很大依赖性。 3 线粒体蛋白的跨膜分选 在游离核糖体合成，以包含“成熟” 蛋白和N端导肽 (1eader peptide)的前体 (precursor) 存在。 导肽引导蛋白通过内外膜的接触点进入线粒体，指导蛋白进入线粒体特定部位后被切除。 蛋白前体跨膜时需解折叠(unfolding)；跨膜后需重新折叠(refolding) ，需 “分子伴侣”参与。 导肽结构特点 常疏水,由非电负性氨基酸构成，中间有碱性氨基酸，但无酸性氨基酸;(线粒体基质带负电荷) 羟基氨基酸含量高（特别是Ser），易形成双亲?螺旋; 不同导肽缺乏同源性，和识别有关的信号不是一级结构，而是二、三级结构; 导肽运送蛋白质时具有以下特点: ①需受体; ②消耗ATP; ③需分子伴侣; ④由电化学梯度驱动; ⑤导肽被切除; ⑥通过接触点进入; ⑦解折叠形式运输。 线粒体内外膜的接触点 位于N端，富含带正电荷和疏水的氨基酸，形成两性α螺旋，完成转运后被切除。 不被切除，含疏水性停止转移序列，被安插到外膜。 被切除，含疏水性的停止转移序列，被安插到内膜。 含两个信号序列，先到基质，第一个信号被切除，第二个信号引导入内膜或膜间隙。 结构类似于N端信号序列，但位于蛋白质内部。 膜转运蛋白，具多个内部信号序列和停止转移序列，形成多次跨膜蛋白。 基质 外膜 内膜 内膜 膜间隙 内膜 内膜 信号序列 定位 线粒体蛋白分选信号 进入线粒体不同部位的蛋白具有不同的转运途径： 1）外膜蛋白：具不被切除的N端信号序列和疏水的停止转移序列，蛋白质被转运复合体安装到外膜上(孔蛋白)； 2）基质蛋白： 通过线粒体内外膜之间的接触点，由质子动力势提供的能量跨越内膜进行运送。 3）进入线粒体内膜和膜间腔的蛋白 ①N端具2个信号，先被运到基质后导肽被切除，暴露出第2个信号序列，