芳烃污染胁迫下产碱假单胞茵的蛋白质表达-上海师范大学学报.PDF

维普资讯 第35卷第4期 上海师范大学学报 (自然科学版) Vo1．35．No．4 2006年 8月 JournalofShanghaiNormalUniversity(NaturalSciences) 2006 ，Aug． 芳烃污染胁迫下产碱假 单胞茵的蛋白质表达 赵 渝r，郭鲁申，高 林 ，陆贻通 ，徐亚同2， (1．上海师范大学 生命与环境科学学院，上海200234；2．华东师范大学 资源与环境科学学院，上海200062； 3．上海交通大学 资源与环境系，上海201101) 摘 要：微生物降解是环境中芳烃类污染物处理的重要手段与方法，研究降解茵暴露在污染 物下蛋白差异表达的情况，可以揭示微生物利用有机物做为碳源与能源的途径与方法．本项 目 以蛋白质二维电泳研究结果为基础，对产碱假单胞茵在污染物胁迫下表达的蛋白质点进行N 端测序分析，对诱导性的同工酶进行了克隆与测序分析．结果显示，产碱假单胞茵在污染物胁 迫下能表达与细茵的趋化性密切相关的蛋 白，在研究的茵株中存在同工不同源的酶系统． 关键词：芳香烃；生物降解；蛋白质组学 中图分类号：Q142 文献标识码 ：A 文章编号：1000．5137(2006)04-0065-05 O 引 言 芳香烃是石油中的一种重要组分，由于各种原因，每年都有大量的石油进入土壤、地下水、海洋、湖 泊等环境体系中，由此引起的土壤污染是 目前公认的世界性环境问题之一 】J．石油污染中的芳烃组分 由于具有较强的毒性和抗降解能力 J，是造成土壤污染的主要因素之一，也是石油污染土壤生物修复 过程关键问题之一 ． 土壤微生物对土壤中有机污染物的降解具有独特的影响，通过对燃油污染的土壤进行的试验表 明，微生物降解大大降低燃油残留物的毒性和持久性 ．微生物对芳香烃降解的起始途径是多样的，但 关键性的中间产物具有一致性 J．研究表明，微生物更多的是可能在污染物胁迫下形成诱导酶系，具备 了新的代谢功能 ．目前，很多微生物的全序列测定已经完成，不少与降解有关的基因已经被定位，并 成为构建基因工程降解菌的工具． 产碱假单胞菌P25X是一株具降解芳香族化合物能力的土壤微生物．研究表明 ，P25X在进行芳 香烃的有氧降解时，具有组成型和诱导型的两种龙胆酸加双氧酶．突变株 SNZ28的组成型龙胆酸 l，2 加双氧酶基因(GDOI)被链霉素／奇霉素抗性基因打断，但在含有龙胆酸盐的基本培养基上，仍能明显 地观察到龙胆酸加双氧酶的活性．蛋白质组研究，证实了诱导型GDO酶(GDOII)的存在 J，但是，由于 微生物在降解代谢中所表达的蛋白质受到多种因素的影响，在二维电泳的差示蛋白质点中有2个点未 收稿 日期：2006-03-10 基金项 目：国家 自然科学基金项 目；国家基础研究重大项 目(2004CB418503)；上海市基础研究重大项 目(40JC1405)；上海生态学重点学科建设资助． 作者简介：赵渝(1973一)，男，上海师范大学生命与环境科学学院讲师，华东师范大学资源与环境科学学院博士研 究生 ；陆贻通 (1945一)，男 ，上海交通大学资源与环境系教授． 维普资讯 上海师范大学学报 (自然科学版) 2006正 找到同源序列．本研究中，我们以产碱假单胞菌SNZ28为主要研究对象，继续研究了土壤微生物暴露在 芳香烃污染物中间代谢产物下蛋白表达的差异情况，同时，为进一步研究微生物在芳烃降解途径中的分 子生物进化状况，对诱导型酶GDOII进行了克隆与测序分析． 1 材料与方法 1．1 菌株 、试剂与培养基 SNZ28，E．coliDH5a菌株与pGEM—T质粒由本室保存，IPG干胶条购 自AmershamPharmacia公 司，蛋 白纯化试剂盒(PlusOne2一DClean—UpKit)、蛋 白定量试剂盒 (2一D