幽门螺杆菌e0p蛋白单克隆抗体的制备与鉴定-江苏大学.pdf

第 卷第 期 江 苏 大 学 学 报医学 版 年 月 幽门螺杆菌 蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 朱虹 陈? 凌峰 邵晨 余敏 邵世和 江苏大学基础医学与医学技术学院江苏 镇江 摘要 目的 制备幽门螺杆菌蛋白单克隆抗体 并鉴 定其特性 方法 用原核表达并纯化的融合蛋白免疫小鼠 周后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合经 亚克隆筛选获得阳性杂交瘤细胞株法鉴定 的亚型间接法测定杂交瘤细胞培养上清和腹腔积液 效价及其相对亲和力相加法分析 的识别表位蛋白质印迹法鉴定 特异性冻溶法检测杂交瘤细胞 株的稳定性 结果 获得 株能稳定分泌抗的杂交瘤细胞株其中两株单抗属类一株单抗属 类轻链 型别均为 型杂交瘤细胞培养上清效价在 之间腹腔积液的效价均达 以上相对亲和力较 高 株 识别 种不同的抗原表位 株 都能与融合蛋白反应其中两株能与全菌蛋白发生特异性 反应杂交瘤细胞经冻存复苏后体外传代仍能稳定分泌 结论 成功制备了抗蛋白的单克隆抗 体为深入研究幽门螺杆菌蛋白的功能和 型分泌系统的致病机制奠定了基础 关键词 幽门螺杆菌 单克隆抗体 杂交瘤 中图分类号 文献标志码 文章编号 基金项目 国家自然科学基金资助项目 江苏省省级科技创新与成果转化专项基金资助项目 高等学校博士 学科点专项科研基金资助项目 作者简介 朱虹 女硕士研究生 邵世和通讯作者 教授博士生导师 第 期 朱虹等幽门螺杆菌蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 蛋白是幽门螺 北京全式金生物技术有限公司公司哥伦比亚培养 杆菌 型分泌系统 基微需氧袋购自 公司蛋白免疫印迹 菌毛结构的表面蛋 反应膜购自 公司鼠单克隆抗体快速分型 白桥联 与靶细胞的特异性黏附 蛋白 试剂盒购自公司 其他化学试剂均为分析 分子上的基序被宿主细胞上的整合素 受 纯按分子克隆实验指南配制 体所识别可激活整合素依赖性的细胞信号转导通