金银花过氧化物酶的三相分离纯化及酶学性质.PDF

20 2017, Vol.38, No.24 食品科学 ※生物工程 金银花过氧化物酶的三相分离纯化及酶学性质 * 罗 磊，董金龙，朱文学 ，薛依涵，关宁宁，张 宽，姬青华 （河南科技大学食品与生物工程学院，河南洛阳 471023 ） 摘  要：采用三相分离法提取纯化金银花中过氧化物酶，结果表明最优纯化条件为pH 5.60、硫酸铵质量浓度 39.49 g/ 100 mL 1 1.38 5.849 87.64% 、提取液与叔丁醇体积比 ∶ ，在该条件下纯化倍数为 ，回收率为 。金银花过氧化物 1 021.6 U/mg 92% 30 酶比活力为 ，色素清除率为 ；酶学性质研究表明：金银花过氧化物酶最适温度为 ℃，热稳定范 10 40 pH 5 pH 4 7 H O 围为 ～ ℃；最适 值为 ， 值稳定范围为 ～ 。在金银花过氧化物酶催化的双底物酶促反应中，当 2 2浓 度一定时，酶对愈创木酚的K 8.12 mmol/L v 1.71 mmol/ min L HO 值为 ， 值为 （ · ）。当愈创木酚浓度一定时， 的 m max 2 2 K 0.822 mmol/L v 1.38 mmol/ min L 值为 ， 值为 （ · ）。金银花过氧化物酶与底物的亲和力由强到弱依次是邻苯三酚、 m max Ca2 ＋ 2 ＋ 2 ＋ 2 ＋ 2 ＋ 邻苯二酚、联甲氧基苯胺、愈创木酚。 Cu Zn Mg Mn 、 、 对金银花过氧化物酶有激活作用， 、 、柠檬酸、 L- 抗坏血酸、 半胱氨酸、亚硫酸钠、偏重亚硫酸钠、十二烷基磺酸钠对金银花过氧化物酶有不同程度的抑制作用。 关键词：金银花；过氧化物酶；三相分离法；酶学性质 Purification of Per