基因工程的工具公开课课件.pptVIP

5. 来源 现在已经从约300种微生物中分离出了约4000 种限制性内切酶(限制酶)。 寻根问底 你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是是什么吗？ 原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。 （二）“分子缝合针”——DNA连接酶 ①作用: ②作用原理： 催化磷酸二酯键形成 把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来。 （二）“分子缝合针”——DNA连接酶 ③类型： 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 （二）“分子缝合针”——DNA连接酶 DNA连接酶和DNA聚合酶是一回事吗？ 比较项目 DNA聚合酶 DNA连接酶 不 同 点 形成磷酸二酯键的方式 只能将单个脱氧核苷酸加到已有的核酸片段的3’末端的羟基上，形成磷酸二酯键 是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键。 是否需要模板 以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条互补的DNA链 是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板 是否参与基因工程 不参与 参与 相 同 点 ①它们的化学本质都是蛋白质。 ②两者均属于酶，具有酶的基本属性和特点。 ③两者都形成磷酸二酯键，即在相邻核苷酸的3位碳原子的羟基与5位碳原子上所连接的磷酸基团的羟基之间形成。 ④两者均参与DNA的复制、逆转录等过程。 将外源基因送入受体细胞。 (三)基因进入受体细胞的载体 ——“分子运输车” ①载体的作用： 质粒 λ噬菌体的衍生物 动植物病毒等 ②载体的种类： LOGO * 基因工程 是指在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞，并使重组基因在受体细胞中表达，产生人类需要的基因产物的技术。 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 操作环境 生物体外 操作对象 基 因 操作水平 DNA分子水平 基本过程 剪切→拼接→导入→表达 结果 人类需要的基因产物(定向) 基因工程的产物： 多彩小鱼 转基因小鼠 转基因小猪 辣椒香蕉 蓝色玫瑰 黑籽番茄 （1）能识别双链DNA的某种特定核苷酸序列 （2）使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷 酸二酯键断开。 1.作用： （一）限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 具有特异性。 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子， 2.作用特点： 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，少数的识别序列由4、5或8个核苷酸组成。 限制酶的识别序列： （一）限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 回文序列 中轴线 在G与A之间切割 EcoRI限制酶的作用 大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ），专门识别DNA分子中含有“GAATTC”这样的序列，一旦找到就从G和A之间剪断。 　 黏性末端　　　　 黏性末端 EcoRI限制酶的切割 SmaI只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。 中轴线 SmaI限制酶的作用 在G与C之间切割 平末端　　　平末端 SmaI限制酶的切割 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 产生黏性末端或平末端 3.结果： （一）限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 4.切割对象： 目的基因和运载体 质粒 目的基因 要想获得某个目的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？一个目的基因有几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端，两个。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的末端。 思考题： LOGO *