甲状腺癌甲基化差异DNA片断的筛选与克隆-内分泌专业论文.docxVIP

蔓·。7878磊3原创性声明 蔓·。7878磊3 原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导F进行的研究工 作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的 地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包 含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共 同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。 作者签名：毋霉柱 日期：03-年6月9日 关于学位论文使用授权说明 本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有 权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论 文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文； 学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。 作者签引事埤标师签名： 日期：疗年6月7日 ★甲状腺癌甲基化差异DNA片断的筛选与克隆 ★ 甲状腺癌甲基化差异DNA片断的筛选与克隆 研究生谢翠松 导师 曹仁贤教授 中文摘要 目的：筛选、克隆甲状腺癌组织与癌旁甲状腺组织的甲基化差异片断。 方法： (1)应用甲基化敏感性代表性差异分析 (methylation—sensitive．representational difference analysis MS-RDA)方法筛选甲状 腺癌与癌旁甲状腺组织的甲基化差异片断(2)克隆、鉴定甲状腺癌与癌旁甲状 腺组织的甲基化差异片断，以生物信息学方法进行初步分析。 结果：经过消减杂交筛选出2个低甲基化差异条带，1个高甲基化差异条带。 将这些条带克隆后进行测序，其中2个低甲基化条带包含3个低甲基化DNA差 异片断，1个高甲基化条带包含5个高甲基化DNA差异片断。经Blastn程序检 索GenBank表明，3个低甲基化差异片断分别与BC029276， ALl57413．18， AL357073．19基因同源，同源性为99％。5个高甲基化差异片断与GenBank各个 数据库同源匹配率在20～35％之间。我们筛选出的差异片断均为新的甲基化差异 片断，其中3个低甲基化片断，2个高甲基化片断被NCBI的GenBank数据库 收录。 结论：在甲状腺癌组织中存在异常甲基化，筛选出的甲基化差异片断有助于 进一步了解异常甲基化在甲状腺癌发生发展中的作用。 关键词：甲状腺癌 甲基化 甲基化敏感性代表性差异分析 湖南省卫生厅重点课题(Z 02—09) Screen Screen and clone of methylative difference DNA fragments in thyroid cancer Abstract objective To investigate the aberrantly methylated status in human thyroid cancer． Methods(1)methylation—sensitive·representational difference analysis(MS—RDA) technique was employed to isolate the aberrantly methylated DNA fragments in thyroid cancer．(2)After they were cloned，these methylative difference fragments were analyzed with Blast tools． Results Following two successive competitive hybridization，2 hypomethylative and 1 hypermethylative genomic bands were identified．By sequencing，3 hypo—and 5 hypermethylative DNA sequences were obtained．5 DNA hypermathylative fragments showed low homology with any known gene of the total GenBank database．It’S sugg- ested that these fragments were from noval DNA sequences which were hypermethy— lated in thyroid cancel．3 hypo—and 2 hypermathylative fragments were embodied by GenBank database．These fragments may provide new information for the researc