甲状腺乳头状癌BRAFTl799A突变表达与临床病理特征、规范化治疗后甲状腺球蛋白值的相关性研究-外科学专业论文.docxVIP

贵阳医学院 贵阳医学院 2014 届硕士研究生论文 PAGE PAGE 10 型，该突变不特异性高发在乳头状癌的普通亚型或滤泡亚型中，肿瘤的突变部分 131 对 I 治疗的效果差，对突变患者因更积极的进行治疗和随访，改善患者的预后。 关键词：甲状腺乳头状癌 BRAF Tl799A 基因位点突变 Tg 前 言 近年来甲状腺癌为国内发病率上升最快的恶性肿瘤之一，而乳头状癌约占所有甲 ［9］ 状腺癌的 80%~90％，是甲状腺癌中预后最好的一类肿瘤 ，但是 5% ～ 20%的 PTC 患者术后会发生复发，如果再次行手术治疗，其手术的风险和并发症会大大 增加,手术完整切除难度更大，部分已经出现远处转移的患者往往预后较差，对 于 PTC 的治疗，目前公认的最佳治疗方案是外科行甲状腺全切或近全切,术后 131 I ［15］ 清除残余甲状腺组织（清甲）以及甲状腺激素的终身替代抑制治疗 。BRAF 基 ［10］ 因又名鼠类肉瘤滤过性毒菌（v-raf）致癌同源体 B1；1988 年由 Ikawa 等 首 先在人类尤文氏肉瘤中发现并将其克隆出来，虽然国内外目前对 BRAF 基因突变 与临床病理特征的关系及突变与预后的关系报道不一 ［3.4］ ，但是目前多数研究 认为该突变和甲状腺乳头状癌的预后密切相关， Riesco 等 ［ 8 ］ 研究发现 BRAFV600E 突变能诱导转化生长因子-B（TGF-B）的分泌, 而 TGF-B 能抑制 Na+ / I- 同向转运体( N IS ) 基因的功能，Na+ / I- 同向转运体( N IS )突变，可 引起肿瘤细胞对放射性碘的摄取力降低，导致了放射性碘治疗的失败，这可能是 最终导致增加甲状腺癌的病死率的重要原因之一，近年来研究发现，Tg 值对于 监测甲状腺癌的残留和复发转移时一个很有临床意义的指标 ［16. 17］ ，Tg 对 PTC 复发或转移灶诊断的灵敏度、特异度和准确性为 76.9%、66.7%和 75% ［19］ ，故本 课题通过对选取我院 PTC 患者的肿瘤标本行 BRAFTl799A 基因位点突变的检测，并 结合患者临床病理特征、规范化治疗前后 Tg 值进行研究，发现基因突变与临床 病理特征、Tg 值变化具有相关性，探讨突变对肿瘤的预后的影响机制。 材料与方法 1.材料 1.1 临床标本：取我院甲状腺外科在 2012 年 7 月至 2013 年 7 月的手术切除的 44 例患者的标本行 BRAFTl799A 基因位点突变的检测，均有完整临床资料，其中 35 例为 PTC 的石蜡组织包埋标本，并在取材时行病理涂片来行乳头状癌亚型分组， 4 例结节性甲状腺肿石蜡标本，5 例为 PTC 术中取新鲜肿瘤标本，诊断均为术后 常规病理诊断， PTC 患者均行甲状腺全切术，并术后均在我院行规范的 131I 清甲 治疗，具体剂量参考按照 2012 年甲状腺结节和甲状腺癌的诊疗指南，清甲前均 检测刺激状态下 Tg,和规范化治疗后 6 个月的 Tg,以上患者同时复查抗甲状腺球 蛋白抗体（TgAb），5 样 PTC 新鲜肿瘤组织标本为术中切除肿瘤后立即在肿瘤中 取样，取约 30g 左右，放置于-80 度冰箱冷冻保存。随访截止于 2014 年 2 月 28 日，随访率 100%，无失访、死亡患者，无一例出现远处转移的临床影像学证据， 1.2.试剂： DNA FFPE Tissue Kit （NO：56404）、 QIAamp PCR Mastermix BioTeke 公司， 引物： BRAF-F 5-GGCCAAAAATTTAATCAGTGGA-3， BRAF-R 5-TCATAATGCTTGCTCTGATAGGA-3. 由生工合成， Cycle-purekit 100 OMEGA 公司， 测序部分检测试剂盒 上海源奇生物医药公司 1.3.主要仪器设备及厂家： G.BOX 凝胶成像系统 G.BOX （DNA 浓度测定仪） Biotek instruments。 Veriti ABS4375786 PCR 仪 ABI ， 3530 测序仪 ABI IMMULITE2000 西门子 2.方法： 组织 DNA 提取： QIAamp 的 DNA FFPE Tissue Kit （NO：56404）试剂盒操作、其中二甲苯 脱蜡二次， 56 度水浴消化约 12 小时，并对提取的 DNA.使用 Biotek instruments 公司的 DNA 浓度测定仪行浓度测定，后 DNA 置于-20 度冰箱 保存。 巢式 PCR 配制 25ul 体系：PCR maste